一文带您了解胞传代后增殖缓慢之谜

　　培养箱里，我们的“小劳模”细胞们每天忙着分裂增殖，为我们的实验贡献着力量。然而，有时候，这些小家伙们却会突然“罢工”，传代后的增殖速度变得慢如蜗牛，仿佛一夜之间爱上了慢生活。这背后究竟是什么原因呢？怎样才能让细胞们恢复干劲呢？请看下文：

　　接种密度低

　　你知道吗？很多细胞都有密度依赖。细胞自身会分泌一些因子到培养基中促进周围的细胞生长（旁分泌）。细胞密度太低，这种化学信号的传递减弱，细胞状态受到影响。接种密度越低，增殖越慢，甚至不增殖。

　　解决方案：根据细胞生长速度确定合适的传代比例和接种密度。如果细胞已经传稀了，可以耐心继续培养，或将细胞重新传到更小的器皿中，增加密度。特别提醒！T25培养瓶底面积为25cm2，10cm培养皿底面积是55cm2，所以一个T25传两个10cm皿约等于1：4传代，而不是1：2

　　培养基、血清不合适

　　想象一下，你突然来到一个全新的城市上学上班，面对全新的环境，是不是也需要适应一段时间呢？细胞突然被换到新的培养基和血清中，也会出现水土不服的情况，特别是对血清要求高的细胞。新的培养基或血清不对细胞胃口时，导致它们“食欲不振”，生长速度自然就慢了下来。

　　解决方案：

　　检查新培养基和原培养基的配方是否有差异，是否需要额外添加试剂，成分尽量保持一致。新培养基和原培养基混合培养1-2代，让细胞慢慢适应，如果细胞正常生长，再完全替换为新的培养基。如果它们实在适应不了新培养基，还是换回原培养基，毕竟实验不等人啊！另外，记得定期换液，别等培养基都变成金黄色了才换，这无异于把细胞活活饿死！

　　细胞受损

　　在细胞传代的过程中，如果发生一些“工伤”事故，比如胰酶消化时间过长，导致它们受伤；消化时间过短，细胞们还没完全分开，就被强行“搬家”了，导致细胞膜受损；重悬时疯狂吹打，生怕吹不均匀，结果把细胞打得半死不活，都会导致细胞增殖速度变慢。

　　解决方案：

　　传代时严格控制胰酶消化时间，控制吹打次数和力道。如果细胞已经受损了，传代后漂浮细胞和碎片很多，可以尝试提高血清浓度（总量不超过20%），帮助它们恢复元气。如果伤情严重，抢救失败，那还是重新复苏吧！

　　细胞衰老

　　原代细胞以及一些有限传代的细胞系，随着传代次数增多，细胞生长速度逐渐减慢，最终停止增殖。

　　解决方案：

　　细胞衰老是自然法则无法避免，但我们可以通过优化培养条件和操作，让细胞尽可能保持好的状态，并及时进行实验。对于有限细胞系，要记得冻存早期代次作为备份。对于原代细胞，则要规范提取步骤，保证细胞质量稳定，实验重复性才能更好。

　　虽然细胞不增殖的时候我们心急如焚，但也让我们更加深入了解自己细胞的特性。通过不断探索和实践，当我们找到了最适合的培养方案，细胞们会更加健康、快乐地生长着。祝各位同学和自己的细胞们相处愉快！