pT3-N90-beta-catenin质粒扩增流程

　　pT3-N90-beta-catenin基本信息

　　别称:Plasmid#31785；CTNNB1 CTNNB EVR7 MRD

　　启动子:EF1a

　　原核抗性:Amp

　　筛选标记:无

　　克隆菌株:DH5a

　　培养条件:37度

　　5'测序引物:请根据序列设计引物

　　3'测序引物:请根据序列设计引物

　　备注:可提供高品质即用大包装

　　质粒属性

　　载体宿主：哺乳细胞

　　载体用途：蛋白表达

　　基因种属：人

　　基因类型：ORF

　　原核抗性：Amp

　　真核抗性：

　　荧光蛋白：

　　pT3-N90-beta-catenin质粒载体扩增流程

　　收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。

　　1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）

　　①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；

　　②取1支100μl感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

　　③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；

　　④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

　　⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h，（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）

　　⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

　　2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

　　3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

　　4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）直接挑取单菌落至液体培养基中。

　　5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）单独提取的液体质粒收到后可直接使用。

　　6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）

　　智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长期保存管理；在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网zlzt.com是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！

　　我们的工作主要包括：广泛分离、收集、保藏、交换和供应各类微生物质粒菌种；保存用于专利程序的各种可培养生物材料；质粒载体类保藏技术研究；微生物分离、培养技术研究；微生物鉴定和复核技术研究；保藏菌种的资料情报收集和提供及编辑微生物菌种目录。