大豆慢生根瘤菌菌种介绍及保藏

　　一、菌种介绍

　　大豆慢生根瘤菌是Bradyrhizobium属的微生物，原产地为中国。

　　中文名称：大豆慢生根瘤菌

　　拉丁名称：Bradyrhizobium japonicum

　　来源历史：CGMCC

　　收藏时间：2020-09-16 00:00:00.0

　　原始编号：USDA 6

　　原产国：中国

　　模式菌株：是

　　生物安全级别：一级

　　其它保藏中心编号：CGMCC 1.2550

　　培养基编号：9

　　培养温度：28-30℃

　　培养时间：24-48h

　　需氧类型：好氧

　　分离基物：**

　　采集地：中国

　　保存方法：冷冻干燥管保藏

　　二、培养基

　　Rhizobium medium（根瘤菌培养基）

　　Yeast eztract（酵母膏）1g Soil eztract（土壤浸提液）200ml

　　Mannitol（甘露醇）10g Agar（琼脂）15g

　　Distilled water（蒸馏水）800ml pH 7.2

　　(土壤浸提液的制法：取土壤50克，加水200毫升，15磅蒸煮1小时，经滤纸过滤后加水补足到200毫升。)

　　三、保藏条件

　　斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在2～8°C保存。西林瓶请置于-20°C保存。甘油管请置于-80°C保存;请勿长期置于室温。注意事项

　　1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取0.3ml的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过2支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过5ml为宜）；

　　2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

　　3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

　　4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

　　5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为2-25年；

　　6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后2个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；

　　7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

　　8）安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

　　9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。10）西林瓶开封：用75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml适宜的液体培养基复溶冻干粉末。