智立中特耻垢分枝杆菌菌种介绍及注意事项

　　一、菌种简介

　　耻垢分枝杆菌。英文名称为mycolicibacterium smegmatis   菌种为纤细杆菌，长3.0—5.0微米，有时弯曲，有分枝或Y形细胞；细胞偶尔膨胀，内有珠状或卵形深染色小体。培育5天后抗酸染色可能不规则(10—80%的细胞抗酸)。抗酸染色后显微镜观察可见被染为红色，可与被染为蓝色的其他细菌鉴别开来。

　　常用LB平板或是苏通液体培养基进行培养。蛋培养基稀释接种，培育2—4天后，生长丰茂，菌落细皱至粗褶，乳脂白色。常见光滑有光泽奶油状菌落。有色菌落稀少，但可见于老培养物和不含蛋的培养基上。在油酸卵蛋白琼脂上有粗糙菌落，略呈圆顶形、颗粒状。光滑菌落圆顶状，中央有暗色颗粒，边缘窄、整齐、半透明。25—45℃生长。少量接种对豚鼠、小鼠、大田鼠或小鸡无致病性。对于正常个体，耻垢分枝杆菌基本可视作非致病菌。分离自包皮垢。一度常见于土壤和水中，近来不常分离到。可以种特异性敏感素、免疫扩散和免疫技术鉴定的均一类群。

　　二、培养基

 

　　三、保藏条件

　　斜面菌种和安瓿瓶冻干菌种应在2～8°C保存。西林瓶请置于-20°C保存。甘油管请置于-80°C保存;请勿长期置于室温。

　　注意事项

　　1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取0.3ml的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过2支平板或者斜面，若接种液体培养基，则试管液体不超过5ml为宜）；

　　2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

   3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

   4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

   5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为2-25年；

　　6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活，请在收到后2个月内和微生物菌种查询网联系，逾期不予受理；

　　7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

　　8）安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

　　9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。10）西林瓶开封：用75%酒精棉擦拭西林瓶外部，在安全柜内使用尖嘴钳去除塑料盖及铝盖，注意不要同时打开胶塞。缓慢开启胶塞，用75%酒精棉消毒瓶口部分，使用无菌吸管注入0.5ml适宜的液体培养基复溶冻干粉末。