上海晶风生物科技有限公司
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细胞库 / 细胞培养、试剂、抗体、ELISA 试剂盒、技术服务
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技术资料/正文
HPV假病毒说明书
638 人阅读发布时间:2022-03-18 09:30
HPV假病毒说明书
【产品名称】
通用名称:HPV假病毒
【包装规格】
15/30/50/100μl/管
【预期用途】
用于HPV抗血清或者单抗中和抗体滴度体外检测。
【检验原理】
中和抗体在体外与假病毒中和,使得假病毒丧失感染细胞的能力,进入细胞的假病毒会表达EGFP等蛋白,通过Elispot读板仪扫描并计数每孔荧光斑点数,通过与假病毒对照组荧光斑点数比较,计算其抑制百分比,通过计算公式可以计算出当假病毒50%被抑制时抗体的稀释倍数,来计算其ID50,用ID50来表示抗体对假病毒中和活性大小。
【主要组成成分】
HPV假病毒颗粒,L1和L2蛋白以及报告基因,自折叠成HPV假病毒颗粒
【储存条件及有效期】
-80℃ 密封贮存。有效期:长期。
避免反复冻融。
生产日期及有效期详见标签。
【样本要求】
样本为HPV假病毒,可在体内复制一轮,操作时需在无菌条件下操作。
【检验方法】
1 预先4-8小时铺293FT细胞于96孔板,每孔细胞数为1.5×104 ,置于37℃、 5% CO2孵箱中培养。
2 加样顺序
2.1 40倍初始稀释:取96孔U型板,于B4- B11孔中各加入152μl DMEM完全培养基,其余各孔中加入120μl DMEM完全培养基。于B4- B11孔中加入血清样品8μl/孔,每样品两复孔。
2.2 10倍初始稀释:取96孔U型板,于B4- B11孔中各加入128μl DMEM完全培养基,其余各孔中加入120μl DMEM完全培养基。于B4- B11孔中加入血清样品32μl/孔,每样品两复孔。
加样顺序表5.2.4 用DMEM完全培养基将假病毒稀释至200TCID50,于第B3-G11孔,每孔加120μl。
5.2.5将稀释板4℃ 放至1小时。
5.2.6 从稀释板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物(或培养基)贴壁缓缓加入预先已铺好细胞的培养板对应孔中,轻拍培养板四周混匀。
5.2.7 将细胞培养板置于37℃、5% CO2的孵箱中培养60-96小时。
5.2.8 ELISPOT读板仪进行检测,计算感染抑制率(%)=1-(样本检测值-细胞对照值)/(病毒对照值-细胞对照值)×100%。
5.2.9 计算ID50。
【阳性判断值】
中和实验过程中需要设置阴性对照,阳性对照,作为参照,来判断实验是否成立,阴性对照ID50小于30,阳性ID50大于30作为判断值
【产品性能指标】
1. 外观
外观应满足如下要求:
1.1包装完整,无破损;外观应整洁,文字符号标识清晰;
【注意事项】
【产品名称】
通用名称:HPV假病毒
【包装规格】
15/30/50/100μl/管
【预期用途】
用于HPV抗血清或者单抗中和抗体滴度体外检测。
【检验原理】
中和抗体在体外与假病毒中和,使得假病毒丧失感染细胞的能力,进入细胞的假病毒会表达EGFP等蛋白,通过Elispot读板仪扫描并计数每孔荧光斑点数,通过与假病毒对照组荧光斑点数比较,计算其抑制百分比,通过计算公式可以计算出当假病毒50%被抑制时抗体的稀释倍数,来计算其ID50,用ID50来表示抗体对假病毒中和活性大小。
【主要组成成分】
HPV假病毒颗粒,L1和L2蛋白以及报告基因,自折叠成HPV假病毒颗粒
【储存条件及有效期】
-80℃ 密封贮存。有效期:长期。
避免反复冻融。
生产日期及有效期详见标签。
【样本要求】
样本为HPV假病毒,可在体内复制一轮,操作时需在无菌条件下操作。
【检验方法】
1 预先4-8小时铺293FT细胞于96孔板,每孔细胞数为1.5×104 ,置于37℃、 5% CO2孵箱中培养。
2 加样顺序
2.1 40倍初始稀释:取96孔U型板,于B4- B11孔中各加入152μl DMEM完全培养基,其余各孔中加入120μl DMEM完全培养基。于B4- B11孔中加入血清样品8μl/孔,每样品两复孔。
2.2 10倍初始稀释:取96孔U型板,于B4- B11孔中各加入128μl DMEM完全培养基,其余各孔中加入120μl DMEM完全培养基。于B4- B11孔中加入血清样品32μl/孔,每样品两复孔。
加样顺序表5.2.4 用DMEM完全培养基将假病毒稀释至200TCID50,于第B3-G11孔,每孔加120μl。
5.2.5将稀释板4℃ 放至1小时。
5.2.6 从稀释板各孔中吸取100μl的假病毒血清混合物(或培养基)贴壁缓缓加入预先已铺好细胞的培养板对应孔中,轻拍培养板四周混匀。
5.2.7 将细胞培养板置于37℃、5% CO2的孵箱中培养60-96小时。
5.2.8 ELISPOT读板仪进行检测,计算感染抑制率(%)=1-(样本检测值-细胞对照值)/(病毒对照值-细胞对照值)×100%。
5.2.9 计算ID50。
【阳性判断值】
中和实验过程中需要设置阴性对照,阳性对照,作为参照,来判断实验是否成立,阴性对照ID50小于30,阳性ID50大于30作为判断值
【产品性能指标】
1. 外观
外观应满足如下要求:
1.1包装完整,无破损;外观应整洁,文字符号标识清晰;
【注意事项】
- 本产品仅供中和抗体体外检测。
- 减少反复冻融
- 流水或者4℃融化使用。
- 无菌操作。
- 本产品不能重复使用。