从“提取”到“直扩”的协同路径——广州湾区生物动/植物直扩PCR方案（DPTI-50/200；DPPL-25/50）

直扩不是“省略步骤”的粗暴简化，而是体系化减少抑制物和提高下游PCR mix 抑制物耐受性优化的工程：

• 动物组织的抑制因素：蛋白、脂质、血红素等对酶活与核酸反应产生影响。

• 植物组织的抑制因素：多糖、多酚、次生代谢物与微量金属离子等，会抑制聚合酶或影响核酸质量。

湾区体系思路：通过缓冲体系、螯合与屏蔽机制、减少抑制物，优化湾区生物直扩PCR mix的抑制物耐受性，实现样本裂解液在优化的PCR mix中稳定地扩增。

3. 数据概览 

• 灵敏度与稳定性：在鼠肝、鼠肉、鼠尾、鼠爪等样本中，湾区直扩体系获得稳定PCR结果，并在重复性上表现稳健。
• 复杂背景耐受：在脂质/蛋白含量较高样本中仍能稳定扩增，阴阳判定清晰。
• 通量优势：省去纯化环节，使批量上样/快速轮转成为可能。
  

• 广谱兼容性：覆盖水稻、玉米、番茄、黄瓜等多作物体系，跨物种稳定扩增。

• 田间样本友好：具备较好耐受，适合田间直采直扩的快检路径。
• 通量优势：省去纯化环节，使批量上样/快速轮转成为可能
  

• 科研/育种高通量筛查：基因分型、突变体筛选、转基因鉴定等，直扩显著缩短周期；对“阳性命中”的关键样本再行传统提取用于下游深度分析。
• 动检/农检/食安现场应用：应急响应、田间快检、初筛环节，用直扩提升速度与覆盖；确证环节再走传统提取。
• 自动化/数字化实验室：直扩更易与微量化、板式化、机器人上样协同，降低人工变异。

• 样本处理：动物组织尽量去脂；植物组织取嫩叶/新鲜组织优先，可减少抑制。
• 裂解步骤：按试剂盒说明的温度与时间执行；裂解后短暂离心去除碎屑更利于一致性。
• 上样体积：遵循推荐用量；当样本抑制疑虑较大时，先小体积探索，必要时做2×以上稀释验证。
• PCR设定：遵循推荐的循环参数与退火温度；多靶标项目建议加入内标以判断抑制风险。

1. 直扩适用于快速检测与高通量筛查，当目标是高纯度核酸或深度下游应用（如NGS、基因克隆构建）时，建议采用传统提取。
2. 不同物种/组织类型的抑制谱不同，建议用户在新物种上线前以阳性/阴性/抑制对照完成快速适配测试。
3. 若遇到临界阳性样本，建议复检或转传统提取验证，确保结果稳健可复核。