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9.9元助力土壤微生物核酸提取,轻松解决土壤核酸提取难题 !

人阅读 发布时间:2024-04-15 14:35

“清明前后,种瓜点豆”,清明一到,气温升高,雨量增多,正是春耕春种的大好时节,清明寄相思的同时,各行各业的人们都与土地有着不一样的春忙故事。

我们赖以生存的土壤是一个非常复杂的体系,由各种颗粒状矿物质、有机物质、水分、空气、微生物等组成。土壤微生物的数量很大,其中绝大部分的微生物都是无法直接培养进行繁殖和研究。从土壤样本中提取DNA是研究土壤微生物最为有效的方法。

因此,提取土壤中的微生物基因组能够直接在分子生物学的基础上研究生态学与生物多样性、环境保护与修复以及菌种筛选。(文末有福利哦)

从土壤样品中提取DNA最大可能性地获得宏基因组,但是从土壤中提取核酸有以下几个难点:

 腐殖酸 

土壤核酸提取的难度比较大是因为其中含有大量的腐殖酸,其中有些物质的性质与DNA十分相似,所以在提取时会与基因组一同被提取出来,而腐殖酸会降低DNA的纯度,抑制下游的PCR扩增实验,且洗脱得到的DNA有颜色,干扰下游实验。

 裂解方法 

复杂多样的土壤样本中的革兰氏阳性细菌和真菌等微生物都有很厚的细胞壁,怎么有效破裂细胞壁也是提取的关键,此外土壤中含有各种金属离子或抑制因子会导致消化酶的活性降低乃至失活。因此如何裂解样本,获取高质量的土壤样本微生物基因组是下游实验能否成功最关键的一步。

 土壤情况复杂 

土壤样品或因肥沃,或因贫瘠,或因含水量丰富,或因干枯,或因取样的深浅度,都会造成微生物数量和品种发生剧烈改变。在一个小范围的土壤样品DNA含量往往会差别成百上千倍。此外,某些土壤中含有的化学成分,如重金属盐,粘土物质都会造成DNA得率降低

常见问题及建议

而我们在提取土壤核酸中也可能遇到如下一些常见问题,我们也分析了一些可能的原因以及一些建议比如:

 问题一:提取的DNA得率低 

1.土壤样本微生物含量少:适当增加样本量。

2.土壤样本使用研磨珠破碎不充分:适当提高研磨仪处理的强度或时间。

3.洗脱效率不够:建议二次洗脱增加产量或提高洗脱体积。

 问题二:提取的核酸出现降解,跑胶有弥散现象 

1.土壤样本使用研磨珠破碎强度过高:适当降低研磨仪处理的强度。

2.土壤样本使用研磨珠破碎强度过长:适当减少研磨仪处理的时间。

3.样品用量过大:森林土壤和草地土壤富含腐殖酸,富含水分的底泥富含有机质,处理这类样本时,样本量减半。

 问题三:DNA纯度低,残留抑制物影响下游实验 

1.样本复杂含有有机质高:需要特别去除杂质,必要时可以使用PBS清洗土壤并收集菌体。

2.杂质去除效果差,杂质残留多:选择有去除蛋白、腐质酸等复杂抑制物的去杂剂。

3.乙醇等没有充分挥发:晾干时间适当,使乙醇充分挥发。

 问题四:DNA有颜色残留 

1.土壤样本用量过多,部分样本腐殖酸含量过高,对于富含腐殖酸的土壤样本(如森林土壤、草地土壤),土壤用量减半,室温放置代替70℃裂解可减少腐殖酸的影响。

2.加入沉淀液和腐殖酸去除液后没有充分混匀,加入沉淀液和腐殖酸去除液后应充分混匀,延长4℃放置时间有利于沉淀的稳定。

3.腐殖酸去除液加入体积不足:使用前先充分混匀,并且使用已剪去枪头尖端的枪头,有效防止因吸头堵塞而导致的加入量不足。

如果不想面对这些问题,可以选择湾区生物采用超顺磁性的磁珠纯化技术研发出的土壤DNA提取试剂盒-BayBiopure磁珠法土壤DNA提取试剂盒助力土壤微生物核酸提取,帮您轻松解决土壤核酸提取难题 !

产品特点

适用样本广:可从土壤和环境样本(淤泥、粪便、沉积物、污水等)中提取DNA。

纳米磁珠具有更小的尺寸和表面效应,与DNA进行特异性结合,能够高效提取DNA。

配备独特的混合研磨珠,高效破裂细胞壁,从而提取更多种类微生物DNA。

特殊的溶液体系,可轻松高效去除腐殖酸。

可手动提取,亦可配套全自动核酸提取仪器一次性完成多个样本的提取。

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