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羟自由基清除能力检测试剂盒说明书 可见分光光度法
人阅读 发布时间：2023-09-18 17:06
羟自由基清除能力检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
微信 13321108309
规格：50T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系作人员。
提取液：液体55 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体10 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体20 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体20 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体0.1 mL×1 瓶，4℃保存。液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 9.9 mL 蒸馏水混匀，也可按试剂四体积（mL）：蒸馏水（mL）=1∶99 的比例，现用现配，配好的试剂 4℃保存一周。
产品说明：
羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。羟自由基清除能力是样本抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H2O2/Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+，导致536nm的吸光度下降，样本536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样本清除羟自由基的能力。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。
2、操作表：在1.5mLEP管中分别加入下列试剂。
三、计算公式：
羟自由基清除率D%=（A测-A对）÷（A空-A对）×100%
注意事项：
1. 为了比较不同样本羟自由基清除能力，对于同一批样本必须加入等量的样本，血清、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。
2. 样本过多时，可以按体积比试剂一：试剂二：试剂三=0.15:0.3:0.3的比例配制工作液，现用现配。
实验案例：
1、 取 0.1 g 小鼠肝脏加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 1 mL 玻璃比色皿测得计算：
羟自由基清除率 D%=(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%
=(0.911-0.401)÷(0.961-0.401)×100%=91.07%。
2、 取 0.1 g 玉兰加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 1 mL 玻璃比色皿测得计算：
羟自由基清除率 D%=(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%
=(0.463-0.401)÷(0.961-0.401)×100%=11.07%。
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
微信 13321108309
规格：50T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系作人员。
提取液：液体55 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体10 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体20 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：液体20 mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：液体0.1 mL×1 瓶，4℃保存。液体置于试剂瓶内 EP 管中。临用前加入 9.9 mL 蒸馏水混匀，也可按试剂四体积（mL）：蒸馏水（mL）=1∶99 的比例，现用现配，配好的试剂 4℃保存一周。
产品说明：
羟自由基是人体在新陈代谢过程中产生的对生物体毒性强、危害大的一种自由基。它可以使组织中的糖类、氨基酸、蛋白质、核酸等物质发生氧化，遭受氧化性损伤和破坏，导致细胞坏死或突变。羟自由基清除能力是样本抗氧化能力的重要指标之一，在抗氧化类保健品和药品研究中得到广泛应用。
H2O2/Fe2+通过Fenton反应产生羟自由基，将邻二氮菲-Fe2+水溶液中Fe2+氧化为Fe3+，导致536nm的吸光度下降，样本536nm吸光度下降速率的抑制程度，反映了样本清除羟自由基的能力。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、恒温水浴锅、1 mL玻璃比色皿、低温离心机、研钵/匀浆器和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
- 组织样本的制备：称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆，10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
- 血清、果汁等液体样本可直接测定。
- 提取物（或者药物）可配制成一定浓度，如5mg/mL。
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至536nm，蒸馏水调零。
2、操作表：在1.5mLEP管中分别加入下列试剂。
| 试剂名称 | 空白管 | 对照管 | 测定管 |
| 试剂一（mL） | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
| 试剂二（mL） | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
| 试剂三（mL） | 0.3 | 0.3 | 0.3 |
| 充分混匀，防止颜色不均一 | |||
| 样本（mL） | 0.15 | ||
| 试剂四（mL） | 0.15 | 0.15 | |
| H2O（mL） | 0.75 | 0.60 | 0.45 |
| 混匀后 37℃孵育 60 min。10000 rpm 常温离心 10 min，取各上清分别测定 536 nm 处的吸光度。空白管、对照管和测定管的吸光值分别记为 A 空、A 对和 A 测。（对照管和空白管只测 1-2 次） | |||
羟自由基清除率D%=（A测-A对）÷（A空-A对）×100%
注意事项：
1. 为了比较不同样本羟自由基清除能力，对于同一批样本必须加入等量的样本，血清、组织匀浆、果汁等液体样本加入同样体积，提取物（或者药物）配制成同样浓度。
2. 样本过多时，可以按体积比试剂一：试剂二：试剂三=0.15:0.3:0.3的比例配制工作液，现用现配。
实验案例：
1、 取 0.1 g 小鼠肝脏加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 1 mL 玻璃比色皿测得计算：
羟自由基清除率 D%=(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%
=(0.911-0.401)÷(0.961-0.401)×100%=91.07%。
2、 取 0.1 g 玉兰加入 1 mL 提取液进行匀浆研磨，取上清后按照测定步骤操作，用 1 mL 玻璃比色皿测得计算：
羟自由基清除率 D%=(A 测-A 对)÷(A 空-A 对)×100%
=(0.463-0.401)÷(0.961-0.401)×100%=11.07%。
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