脑是机体最为复杂的系统，决定着情感、记忆、学习等生理活动。神经环路是脑行使功能的基础，明确神经环路的构成和工作原理，对于认识脑、利用脑和保护脑具有十分重要的意义。目前，嗜神经工具病毒被广泛用于中枢神经和外周神经的解剖学研究，在神经环路结构和功能解析研究中发挥重要作用。

PRV Bartha最初被用于通过注射外周组织研究传出神经通路，以及通过抗体免疫组化研究外周神经通路。在仓鼠玻璃体腔注射可表达绿色荧光蛋白的 PRV Bartha 衍生物 PRV-152 后，病毒仅通过自主神经回路逆向跨突触传播，感染视交叉上核^[1]。Banfield^[2]等构建表达红色荧光蛋白的 PRV Bartha 重组病毒 PRV-614，建立双病毒跨神经元标记技术，研究单个神经元与大脑中的多个神经回路之间的连接。Jia 等^[3]优化了报告基因的表达水平，构建了两个新的逆行跨多突触示踪病毒 PRV531 和 PRV724。

随着PRV病毒在中枢神经环路和外周器官中枢调控网络研究领域的广泛应用，布林凯斯在PRV生产和使用等方面积累了丰富经验。目前PRV在中枢神经系统环路示踪研究中的使用趋于成熟，但是在外周脏器的中枢调控网络解析中，一直存在示踪效果不佳的情况，例如示踪结果不稳定、荧光信号弱，标记效率低等。

详见往期推文：小布tips | 外周——中枢神经环路标记整体服务

 

下面，小布就以我们公司PRV在中枢标记及外周不同部位的注射测试结果为实例，分享一些PRV使用tips。

PRV在小鼠中枢及外周使用对比

 

PRV在小鼠中枢及外周的示踪测试效果图

1、中枢网络示踪

产品：BC-PRV-724；

剂量：100 nl；

表达时间：3天。

 

2、某内脏器官的神经调控网络示踪

产品：BC-PRV-531-Plus；

剂量：3 ul；

表达时间：4-5天。

 

3、某腺体的神经调控网络示踪

产品：BC-PRV-531-Pro；

剂量：3 ul；

表达时间：4-5天。

 

Notes：

1. 由于PRV病毒对动物机体有一定的毒性作用，建议选择成年且健康状况良好的动物开展实验，以便更高效地完成相关示踪研究。

2. 注射PRV病毒之后，大约3-5天左右小鼠会出现相应的症状，应定期监测小鼠状态，当出现蜷缩不动、抽搐、颤抖等症状时可进行灌流取材，濒死状态取材时PRV感染效果最佳。

3. 注射PRV病毒之后，小鼠出现症状的时间窗不易掌控，建议从注射后第3天增加监测小鼠的频率；

4. PRV为逆向跨多突触病毒，动物实验时，可根据环路连接级数设定不同的取材时间。根据病毒生活周期推测其在中枢内的传播速度可能为24-36h，跨一级突触；36-48h跨两级突触；60-72h跨三级突触或更多，所以应根据实验需求合理安排取样时间。

5 活体实验中，若因表达时间较短等原因造成荧光信号较弱的情况，可通过免疫组化实验放大荧光信号。

 

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参考文献

1. Pickard G E，Smeraski C A，Tomlinson CC，Banfield B W，Kaufman J，Wilcox C L，Enquist

L W，Sollars P J.J.Neurosci.，2002，22: 2701-2710

2. Banfield B W，Kaufman J D，Randall J A，Pickard G E．J．Virol．，2003，77: 10106-10112

3. Jia F，Lv P，Miao H，Shi X，Mei H，Li L，Xu X，Tao S，Xu F．Front．Neuroanat.，2019，13: 63

 

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