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肿瘤免疫靶点| BCMA(2)

人阅读 发布时间:2020-10-17 20:14

上篇肿瘤免疫靶点| BCMA(1)概述,让我们了解到围绕BCMA靶点的三种主流肿瘤免疫疗法开发方案(CAR-T,BiTE和ADC),而三种方案显而易见都是依托对Anti-BCMA抗体的不同改造,实现新药的开发。今天我们通过DimAbTM平台来看看缔码生物围绕BCMA靶点在较短的时间里 (4.5月)完成从抗原制备一直到功能性抗体的验证过程。
DimAbTM平台
 
图 1. DimAbTM重组单克隆抗体制备平台
DimAbTM重组单克隆抗体制备平台不需要进行杂交瘤融合,可以应用于不同物种重组单克隆抗体的制备,不再有种属限制,在完成动物免疫后直接从免疫动物的外周血中获取阳性B细胞并克隆抗体基因和测序。从单只免疫动物中可以得到超过上千个ELISA阳性B细胞克隆,总体阳性克隆获得率远超传统杂交瘤平台。从DimAbTM开发平台获得的大量克隆株中,我们可以更为高效的筛选出具有高特异性,高灵敏度和高亲和力的重组单克隆抗体,同时也可以直接基于抗体基因序列对重组单克隆抗体进行下游抗体编辑,优化和功能鉴定(例如抗体人源化,亲和力成熟,双特异性抗体,构建细胞株等)。
BCMA靶点产品开发
借助哺乳动物细胞表达平台及DimAbTM重组单克隆抗体平台,我们得以实现BCMA功能蛋白、兔单抗、双特异性抗体(BiTE)、人源化抗体及人源化单抗的双特异性单链抗体的开发,依托严格的验证体系使其高效高质服务于科研&临床前市场。

图 2. DIMA针对BCMA靶点产品开发流程
01 BCMA功能蛋白  
为了确保BCMA重组表达蛋白具有功能活性,我们进行BCMA受体-配体互作验证,同时我们也验证了BCMA重组蛋白和和蓝鸟公司在临床三期的CAR-T结构bb2121的原始中和性抗体huC11D5.3的体外结合能力。我们的功能蛋白可以应用于在以下常规研究中:BCMA抗体药物开发靶点抗原、验证已经开发的抗体药先导分子,BCMA体外或体内功能分析, BCMA诊断原材料,BCMA抗体亲和力等功能性分析。
图三. 重组表达BCMA蛋白和其配体蛋白BAFF互作验证:

Figure 3. ELISA plate pre-coated by 2 μg/ml (100 μl/well) Human BAFF, hFc tagged protein (PME100043) can bind Human BCMA, mFc tagged protein in a linear range of 0.03-15.625 ng/ml.
图四. 重组表达BCMA蛋白和bb2121的原始中和性抗体huC11D5.3的互作验证:

Figure 4. ELISA plate pre-coated by 2 μg/ml (100 μl/well) Human BCMA , Fc-His tagged protein can bind Anti-BCMA (Neutralizing antibody clone huC11D5.3) in a linear range of 3.71-22.29 ng/ml.
02 BCMA兔单抗  
利用DimAbTM重组单克隆抗体平台,我们从4ml免疫后兔全血筛选获得了70株ELISA阳性B细胞克隆,其中18株流式验证工作。而这些只是BCMA DimAb重组单抗B细胞种子库中的一小部分,后期可以随时扩
图五. DimAb兔重组单抗种子库:
 
Figure 5. DimAb recombinant monoclonal antibody B cell seed library
对流式工作B细胞克隆株进行二代测序获取BCMA抗体基因序列,重组表达BCMA DimAb:利用ElisaIP流式评估鉴定BCMA DimAb活性功能,拓展其科研应用场景。我们也欢迎各位老师申请BCMA DimAb的试用探索不同应用。
图六. Anti-BCMA兔流式单抗亲和力分析:
 
Figure 6. Affinity ranking of different DimAb clones by titration of rabbit DimAb antibody concentration onto K562-BCMA or NCI-H929 cells. Different concentrations of various anti-BCMA DimAb clones were incubated with K562-BCMA or NCI-H929 cells at 37℃. Bound rabbit IgG was detected in flow cytometry analysis. The Y-axis represents the mean fluorescence intensity (MFI) while the X-axis represents the concentration of IgG used.
03 BCMA双特异性抗体(BiTE
双特异性抗体是当前治疗性单抗的研发热点,通过将抗体的靶点结合能力和T细胞的瘤细胞杀伤能力组合起来从而赋予抗体更多功能。DimAbTM重组单克隆抗体平台提供的抗体基因序列信息可以让我们直接构建功能化的双特异性抗体我们通过工程改造BCMA DimAb,构建BiTE,“绑架”T细胞杀伤MM细胞,表明BCMA靶点抗体对于MM治疗的巨大潜力。这既是对前药的前期试验,老师们也可以延续这个思路,围绕BCMA和其他靶点的双特异性抗体开展更深层次的蛋白、细胞、动物模型等功能实验,给自己的科研加分加彩。
图七. BiTE双特异性抗体功能示意图:

Figure 7. The basic principle of BiTE cell killing assay. The BiTE molecule can effectively bring T cells to tumor target cells and stimulate tumor cell killing activity of T cells.
图八. Anti-BCMA BiTE双特异性抗体瘤细胞杀伤实验分析:

Figure 8. Tumor cell killing assay. NCI-H929 cells (stably transfected with luciferase), were incubated with freshly isolated human PBMC, and different concentration of BiTE antibodies constructed from rabbit Anti-Human BCMA Clone, or Bluebird(bb2121). After 48hrs incubation, the viable NCI-H929 tumor cells were measured by luciferase activity assay.
04 BCMA人源化单抗(#DM6在研)
开发治疗性单抗,人源化改造是核心步骤。缔码生物已经建立了自己的人源化抗体改造平台。这里我们将功能性抗体DM6克隆成功的进行了人源化改造,并保持其良好的亲和力。
图九. 流式分析人源化改造的DM6克隆:

Figure 9. Flow cytometry analysis with DM6 on K562-BCMA (K562 cells stably transduced by human BCMA full length gene) and K562 (Negative control cell line).
如果老师有意开发针对BCMA靶点的ADC或CAR-T疗法,现成DM6可以快速助力您的起步。不满意?我们还有BCMA DimAb重组单抗B细胞种子任您筛选改造。想要开发人源化BiTE?那您接着往下看。
05 人源化BCMA-BiTE#DM6在研)
我们继续在人源化DM6基础上构建了BiTE双特异性抗体,与Bluebird(bb2121)平行比较细胞杀伤实验测试,表现亮眼。我们对此充满信心,已将开发推向动物给药试验,期待有一个更好的数据表现。您觉得这个BCMA-BiTE效果如何?
图十. 流式分析人源化改造的DM6克隆:

Figure 10. Tumor cell killing assay.K562-BCMA (K562 cells stably transduced by human BCMA full length gene) , were incubated with freshly isolated human PBMC, and different concentration of BiTE antibodies constructed from rabbit Anti-Human BCMA Clone DM6 (red line), or bb2121 originated huC11D5.3 clone (blue line) or a no BCMA binding clone as negative control (yellow line). After 48hrs incubation, the K562-BCMA cells were measured by luciferase activity assay.
BCMA产品与合作
未来,我们希望和对该靶点感兴趣的老师和机构一起合作,继续深入开发以BCMA为靶点的功能性抗体产品。目前BCMA相关蛋白、BCMA流式兔单抗、BCMA双特异性抗体已上线,欢迎垂询和测试。

图 11.  部分产品展示
 
联系方式:
电话:18062749453
邮箱:info@dimabio.com
 

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