北京百瑞极生物科技有限公司
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GUS染色液操作步骤
人阅读 发布时间:2020-07-23 15:37
一、 GUS 染色工作液配制:
注:GUS 染色工作液最好现用现配, 短期贮存可以-20℃ 保存 2-3 天。
二、 GUS 染色步骤:
1.预处理:将叶片、 花瓣、 根茎等组织剪成小片, 放于1.5ml 离心管中, 加入预冷的 90%**完全覆盖材料, 常温处理 20-30 分钟。此步骤可以预固定组织并且可以去除部分叶绿素。
注:用于染色的植物材料的制备方法要因涉及的特定组织和器官的不同而异。例如, 拟南芥的根、花和叶片以及烟草幼苗的根就可以不作任何预处理而直接染色。但是像烟草和马铃薯这些植物的茎和叶就必须在染色前切成薄片( 1-3mm)。当操作大的组织和样品时, 可以选用真空渗入法来帮助底物渗入细胞。
2.染色:用蒸馏水将材料漂洗干净后置于 1.5ml 离心管中;加入适量配制好的 GUS 染色工作液至完全覆盖材料;锡箔纸包好常温过夜放置。
3.洗脱:用 25%, 50% 70%, 95%乙醇梯度洗脱, 摇床轻摇每次 20 分钟。
4.观察:肉眼或显微镜下观察, 白色背景上的蓝色小点即为 GUS 表达位点。