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详解抗体保存要点及其它相关信息

人阅读 发布时间:2021-08-20 10:20

抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白(免疫球蛋白不仅仅只是抗体)。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质,仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中,及其B细胞的细胞膜表面。抗体能识别特定外来物的一个独特特征,该外来目标被称为抗原。
             

抗体由于性质和所使用的储存条件等各有不同,其保质期可能从几周到几年。抗体能否正确保存,直接决定了抗体的活性和使用效果。每个抗体有其独特的保存最佳条件,但我们依然可以总结抗体保存的一般准则以及一些注意事项。抗体必须存放在适当的温度和pH值范围。为了维持蛋白质的活性,以及防止其聚集,经常保存在一定浓度的甘油,蔗糖,或类似的物质里面。如果抗体保存得当,大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。

1、 抗体保存要点
(1)收到抗体后需先在 12000 rpm 离心 1-5 分钟,再打开管盖进行分装和保存,如果抗体体积不足50 ul,可延长离心时间至 5 分钟,从而确保抗体全部离心下来。
(2)对于大部分抗体,比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃或-80℃,也可4℃短暂保存1-2周,并不影响抗体活性。
①对绝大多数抗体来说,保存在-20℃即可。如果抗体在2周内会使用,推荐在4℃保存,这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。如果要长期保存则最好是在-20℃或-80℃。当然最关键的是按照说明书的推荐来进行保存。但是,腹水形式的产品收到后需立即冻存,因为该类产品含有大量的蛋白酶,长期在4℃保存会导致抗体的降解。
②分装可以降低反复冻融对抗体活性的损害,同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。分装的量以一次实验用完为好,最少不能少于10ul每份。因为分装体积越小,抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。复融后的分装抗体如果一次用不完,需将剩余母液保存在4℃,避免再冻起来。
③抗体工作液应该当天配制当天用完,在4℃尽量不要超过1天。
④尽量将抗体保存在冰箱里层,而不是门上。且避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
(3)大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1-2周的时间,所以是在4℃的条件下来完成的。4℃运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害,如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻,这就多了一次冻融的过程。所以运输过程中避免干冰运输。
                 

2. 抗体保存示例
(1)多克隆抗体

多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。即使没有甘油,只要你不反复冻融,抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。此外,该抗体浓度应高于1mg/ml,因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。
(2)单克隆抗体 
单克隆抗体可以加入50%的甘油存放于-20℃。也可4℃或-20℃保存于饱和硫酸铵中。一般不会出现失活、细菌滋生以及氧化等现象。而冻干法(冷冻干燥,干燥或从冰冻状态)为一些冰冻以后不稳定抗体提供了一种替代的保存方法。在大多数情况下,冻干的抗体最好是存放在-20℃。但冻干法需要昂贵的设备和劳动力。
​​​​​​​(3)带标记的抗体
带标记的抗体一般储存在黑色容器中或者用锡箔纸包裹。
①酶标记抗体
碱性磷酸酶和其他酶结合物对于冷冻特别敏感,一般应在4°C短期存储。标记抗体长期保存最好是在终浓度为50%的甘油或乙二醇中于-20°C保存。虽然某些酶结合物可在无保护剂的情况下于-20°C储存,但必须分装,以防止反复冻融。
②荧光标记抗体
荧光遇光容易分解,荧光标记的试剂(不只是抗体)必须避光保存,其应该存放在4°C,避免让其凝固。
           

3. 抗体保存其它相关信息:
(1)甘油保存
有些科研工作者会向抗体中加入50%的甘油来避免反复冻融,甘油在-20℃会降低冰点。这对很多抗体可能是可行的。加入甘油的溶液不建议在-80℃保存,因为这已经超过了甘油的冰点。如果需要加入甘油来保存抗体的话,请注意无菌操作,避免污染。
(2)蛋白保护剂
蛋白在高浓度时更不容易降解(1 mg/ml 或者更高),这就是为什么在抗体中加入 BSA 之类作为稳定剂的原因了;另一方面,加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
(3)关于sodium azide 的使用
为了防止微生物污染经常被加入到抗体中(终浓度 0.02% (w/v))。但在下述情况中不能使用sodium azide:
①如果抗体用于染色或处理活细胞,用于体内研究:sodium azide在抵抗微生物的同时,对其它大部分有机物也是有毒的,  因为它阻断了线粒体的 cytochrome electron transportsystem。
②要偶联带有氨基基团的抗体:sodium azide会干扰任何含有氨基基团的偶联,因此在进行偶联之前,应将sodium azide去除。偶联后的抗体可以加入sodium azide保存,但是浓度只能是0.01%。对于需要偶联的抗体,thimerosal (merthiolate)可以替代sodium azide作为保护剂。
此外,如果需要去除sodium azide,可以通过凝胶电泳或过滤的方式,IgG  的分子量是 150kDa,分子量只有65Da。使用cut off 14kDa的滤膜即可将sodium azide从抗体中去除。
          

                           

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