上海西格生物科技有限公司
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鉴别细胞污染的方法
人阅读 发布时间:2020-07-28 12:00
在发现培养的细胞出现生长异常时需要对细胞的污染情况进行鉴别,以利于采取补救措施。常见的污染鉴别方法如下:
一、细菌、真菌污染的检测
1.肉眼观察
细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生,而且增生迅速,若有污染,在48小时内可明显观察到,例如培养液变混浊,或略加振荡有很多漂浮物漂起。
2.接种观察
采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种,也可发现是否有污染。
3.镜下观察
在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮,即为细菌污染。
若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。
二、支原体污染的检测
1.相差显微镜观察
直接取少许培养液滴在载物片上,再盖上盖片观察,支原体在镜下呈暗色微小颗粒,多位于细胞与细胞之间,有时可见类似于布朗运动的表现。
应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。
2.荧光染色法观察
用荧光染料Hoechst33258,此染料能与DNA特异地结合,可使支原体内的DNA着色,荧光显微镜下支原体呈绿色小点,散在于细胞周围或附于细胞表面。
3.电镜检测
若条件许可,可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48~72小时,细胞接近汇合前,用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。
支原体扫描电镜[图]:
4.培养检测
将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基,培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀,然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中,再用琼脂培养基做分离培养,37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。
三、病毒的检测
1. 应用电镜技术快速诊断动物病毒病
冠状病毒电镜图:
2.逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒
一、细菌、真菌污染的检测
1.肉眼观察
细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生,而且增生迅速,若有污染,在48小时内可明显观察到,例如培养液变混浊,或略加振荡有很多漂浮物漂起。
2.接种观察
采用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种,也可发现是否有污染。
3.镜下观察
在倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮,即为细菌污染。
若细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。
二、支原体污染的检测
1.相差显微镜观察
直接取少许培养液滴在载物片上,再盖上盖片观察,支原体在镜下呈暗色微小颗粒,多位于细胞与细胞之间,有时可见类似于布朗运动的表现。
应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。
2.荧光染色法观察
用荧光染料Hoechst33258,此染料能与DNA特异地结合,可使支原体内的DNA着色,荧光显微镜下支原体呈绿色小点,散在于细胞周围或附于细胞表面。
3.电镜检测
若条件许可,可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48~72小时,细胞接近汇合前,用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。
支原体扫描电镜[图]:
4.培养检测
将细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基,培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀,然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中,再用琼脂培养基做分离培养,37℃培养3天观察有无“荷包蛋”菌落出现。
三、病毒的检测
1. 应用电镜技术快速诊断动物病毒病
冠状病毒电镜图:
2.逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒