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上海碧云天生物技术股份有限公司
入驻年限：6 年
- 联系人：
碧云天
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上海 松江区
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试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒、技术服务、耗材、实验室仪器 / 设备、论文服务
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免疫染色技术讲堂(1) -1
人阅读 发布时间：2020-10-16 09:25
一. 样本制备
细胞和组织是免疫染色实验中主要样本来源，两种样本的制备方法也各不相同。
- 组织样品制备
石蜡切片 制作过程包括固定、脱水、浸蜡、包埋、切片、贴片、烤片及脱蜡等过程。切片厚度在4μm左右，组织固定时常用醛类固定剂（福尔马林/Paraformaldehyde），固定的目的是为了让组织尽可能地接近体内状态，同时也是避免某些蛋白迅速降解。固定时需将组织样品切成小块，添加足够剂量的固定剂，通常固定剂的体积为组织块体积的10-15倍。染色前需先经过脱蜡和抗原修复。脱蜡时，需要将切片依次浸泡在Xylenes、无水乙醇、90%乙醇、70%乙醇和蒸馏水中，确保脱蜡完全，否则会造成背景出现不均衡染色，石蜡的自身荧光也会影响免疫荧光实验效果。
冰冻切片 制作过程相对用时较少，采取新鲜样品后加入OCT包埋剂浸没组织，然后将特制的小盒缓慢平放入液氮中，保证盒子底部接触液氮即可，大约10-20s组织即可迅速冰冻成块，需要注意的是严格把控冷冻时间，切勿过长，避免出现组织断裂。随后利用包埋剂将组织块固定于冷冻托上，即可采用冰冻切片机进行切片，切片厚度在4-10μm。对于新手而言，想要获得组织完整的冰冻切片并非易事，贴片时也是很容易功亏一篑，所以还是需要大家多多练习哦！
那么在具体实验中，我们该如何决定采用哪种样本进行染色呢？
小编建议您可以从以下几方面进行考量：
首先要考虑待测抗原的稳定性。对于本身不稳定的抗原，建议选择冰冻切片。因为石蜡切片制备过程中的一系列操作对于本身就不稳定的抗原来说更是“雪上加霜”。而如果待测抗原性质稳定，选择哪一种其实都可以，但是相对而言，石蜡切片的染色效果要比冰冻切片更好一些，而且石蜡切片更适宜长久保存。
其次，石蜡切片可以很好地保存组织细胞的形态结构，细胞定位更加准确，而冰冻切片由于冰晶的存在可能会破坏组织细胞的形态结构，从而造成抗原的弥散。
最后，石蜡切片制作过程繁琐，耗时久，而冰冻切片相对比较简便，并且可以采用新鲜组织直接冷冻切片，因此常用于手术中的快速病理诊断，并且冰冻切片能很好地保存组织中脂肪、类脂等成分，并且在免疫荧光实验中能够相对避免石蜡自发荧光的干扰。
- 细胞样品制备
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