偶联技术的应用背景

1.怎么定义偶联？ 

将酶、生物素、荧光素、琼脂糖、磁珠等一些易于检测或易于分离的物质，用一定的技术共价标记或缀合到抗体、蛋白质或其它小分子物质上。
 

2.为什么会有偶联技术 的产生？ 

 抗体、蛋白质或其它小分子的偶联是许多类型的生物学实验的必要步骤。

比如：为了在免疫测定（比如WB/IHC/IF等免疫学实验）中进行特异性蛋白的检测，我们将一抗或者二抗上偶联上酶、荧光素等；在细胞染色（生物成像）应用中，将活性染料（荧光素）直接与细胞外或细胞内的蛋白（多肽）结合，以产生可见且可测量的染色；

将蛋白质或抗体上偶联琼脂糖或磁珠，提供了靶向纯化的方法。比如，Abbkine用于IP实验的琼脂糖（磁珠）偶联的抗体，直接省去了ProteinA/G的使用。

为了简化偶联的过程，商业化试剂盒和服务应运而生！
 

LinKine™偶联系列产品线

AbFlour系列是Alexa Flour, Dylight系列的完美替代
 

1.LinKine™偶联系列产品线的内涵和外延有哪些？

LinKine™ 偶联标记试剂盒提供快速标记抗体、蛋白质、多肽等生物分子所需的全套试剂，仅需3个简单的步骤，即可获得高品质的偶联产物。

可直接标记 HRP，Biotin，FITC，Cy3，AbFluor ™荧光染料以满足科研应用，药物研发以及诊断试剂盒开发的需求。

操作简便，稳定高效，偶联标记后的抗体，可兼容各类免疫学应用，比如ELISA 、 流式细胞术、免疫印迹、免疫组化以及免疫荧光等。

欢迎进入视频中心查看Linkine偶联试剂盒操作步骤：http://www.abbkine.cn/technology-center/video-center

 

2.可标记哪些生物分子？

抗体、蛋白质、多肽、生物分子等（含游离氨基），结构上的伯氨基—NH2。
 

3.偶联物有哪些类型？

• 酶/生物素

产品名称	货号
LinKine™ HRP Labeling Kit	KTL0100
LinKine™ AP Labeling Kit	KTL0110
LinKine™ Biotin Labeling Kit	KTL0120
LinKine™ Biotin-XX Labeling Kit	KTL0125

 

• 传统荧光染料

产品名称	货号
LinKine™ FITC Labeling Kit	KTL0210
LinKine™ Cy3 Labeling Kit	KTL0220

 

• AbFlour新一代荧光染料

产品名称	货号
LinKine™ AbFluor™ 350 Labeling Kit	KTL0500
LinKine™ AbFluor™  405 Labeling Kit	KTL0510
LinKine™ AbFluor™ 488 Labeling Kit	KTL0520
LinKine™ AbFluor™ 555 Labeling Kit	KTL0530
LinKine™ AbFluor™  594 Labeling Kit	KTL0540
LinKine™ AbFluor™ 647 Labeling Kit	KTL0550
LinKine™ AbFluor™  680 Labeling Kit	KTL0560
LinKine™ AbFluor™  750 Labeling Kit	KTL0570

LinKine™偶联系列产品线性能

提供形式：试剂盒

主要组分：标记缓冲液(labeling solution)；激活的酶/染料 (activated solution)；终止粉/纯化柱

规格：3*20 μg/100 μg/3*100 μg/1 mg

储存方式：试剂盒，HRP和生物素4度储存6个月，荧光染料偶联试剂盒-20度保存6个月。

偶联产物，短时间使用，4度保存至少一个月；长期储存，分装存于-20度，或加等体积甘油，荧光偶联物注意避光。
 

常见问题解答FAQ

Q1. 客户如何选择规格？

我们的规格是以最适可标记的抗体量来的，因为不同摩尔比的都可以做偶联，只是偶联效率不同。

如100 µg, labeling from 75 µg to 300 µg and optimized for 100 µg of antibody

 

Q2. 客户标记蛋白，可以按照我们的实验体系步骤做吗？

我们试剂盒默认是以抗体来摸索最适比例和实验体系步骤的，客户如果标记蛋白需要根据蛋白的分子量进行相应调整，当然，按照我们的体系来做也是一定可以标记，只是可能不是在最适条件下。

 

Q3. 试剂盒可以做多少次？

HRP的需要终止液，1X规格提供1管，3X规格3管，因为终止粉末溶解后须在48小时内使用，所以上1X可以做1次，3X可以做3次；其他盒子需要纯化柱， 1X规格提供2个，3X规格3个，所以上1X可以做2次，3X可以做3次。

 

Q4. 抗体溶液组分的要求？抗体浓度要求？

一般推荐PBS，不能含甘氨酸等含有氨基的组分，甘油浓度不能太高，具体详见说明书试剂准备部分。

抗体浓度一般要求大于2mg/ml，因为体系的终浓度为2mg/ml，浓度太低建议浓缩，以便达到适宜的偶联效率。

 

Q5. 关于偶联效率问题？

每个染料不一样，一般一个抗体上偶联3-6个荧光染料是合适的，不同的抗体由于结构不一样，可能有些差异。

①抗体浓度计算：C(mg/mL) = {[A280 -(Amax×Cf)]/1.4} × 稀释因子。

• C 是指实验收集的偶联物浓度；
• 稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数；
• A280 和 Amax 分别是指在 280 nm 处的吸光度以及在最大吸收波长处的吸光度；
• Cf 是校正因子，不同染料不同；
•  1.4 则是指 IgG（mL/mg）的消光系数。

②DOL计算: DOL = (Amax× Mwt × 稀释因子)/(ε × C)

•  Amax 指在最大吸收波长处的吸光度;
• 稀释因子是指在光度测量时的稀释倍数；
• C 是指实验收集的偶联物浓度；
•  Mwt 是指待标记样本的分子量；
• ε 是染料的消光系数；
• 生物素标记试剂盒，可以用HABA-亲和素方法进行检测；
• HRP标记试剂盒，标记率=OD403/OD280。

 

为了广大“因粉”的厚爱，我们还会有很大科研惊喜等着大家哟。我们还有大量的细胞因子新指标将会陆续与大家见面。同时，Abbkine的技术专家为了给广大读者提供学习生物知识的平台，经过不懈努力，将多种高端生物实验的干货整理出来，后期陆续在微信公众号中刊登，请广大热爱科学的读者持续关注Abbkine公众号。

 

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Abbkine专注于蛋白学和细胞学领域，致力于创新和研发各类抗体、蛋白质、分析试剂与试剂盒，以期成为生命科学研究发展、药物研发等领域的关键推动者。我们为您提供蛋白和免疫研究用户最喜爱的产品，从免疫学基础产品，如蛋白提取定量，到免疫学实验的内参标签抗体、一抗及二抗等；细胞研究用户最喜爱的产品，从用于检测细胞状态的染料及试剂盒，细胞器提取试剂盒，细胞亚结构染色示踪及细胞代谢检测产品，到用于细胞培养的细胞因子及蛋白类检测试剂盒，只为助力您的研究事业！