琼脂糖凝胶电泳原理

琼脂糖凝胶电泳是一种广泛应用于分子生物学实验中用于分离和鉴定DNA或RNA片段的技术，其核心原理基于“电泳”与“分子筛”的双重作用。

一、基本原理
‌电泳作用‌
核酸分子（如DNA、RNA）的磷酸骨架使其在中性或碱性溶液中带负电荷。当施加直流电场时，这些带负电的分子会向正极（阳极）迁移。

‌分子筛效应‌
琼脂糖溶于加热后冷却形成三维网状凝胶结构，其孔隙大小与琼脂糖浓度相关。较小的DNA片段更容易穿过孔隙，迁移速度快；而较大的片段受阻更大，迁移速度慢。因此，不同大小的核酸片段在电泳后会分布在凝胶的不同位置，形成可分辨的条带。

‌条带可视化‌
实验中通常在凝胶中加入荧光染料（如溴化乙锭EB或更安全的替代染料），这些染料可嵌入DNA双链中。在紫外光照射下，DNA条带会发出荧光，便于观察和拍照记录。

‌片段大小测定‌
通过与已知大小的DNA Marker（标准分子量标记物）并列电泳，可以对比目标条带的迁移距离，从而估算未知DNA片段的大小。