“酶”力四射：胶原酶的选型指南

简单定义： 一种能够特异性降解胶原蛋白（细胞外基质主要成分）的酶。来源： 主要从溶组织梭状芽孢杆菌中提取。核心特点： 不同于胰蛋白酶（只消化细胞间连接蛋白），胶原酶能直接“啃食”胶原纤维，是组织解离的关键。

类型：
胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
胶原酶Ⅰ：含有比较均衡的胶原酶、中性蛋白酶、梭菌蛋白酶等。用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞，用于哺乳动细胞的分离。特点： 应用最广泛，通用性强。
胶原酶Ⅱ：含有更高的梭菌蛋白酶活性。适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。特点： 对细胞膜损伤更小，利于原代细胞活性保持。
胶原酶Ⅲ：包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。特点： 纯度更高，酶活性更“干净”。
胶原酶Ⅳ：含有极低水平的胰蛋白酶活性，对细胞最温和，适用于对酶敏感的特殊细胞（如肝细胞）。特点： 纯度更高，酶活性更“干净”。

如何选择

· 组织结缔组织多 -> 选Ⅱ型

· 组织结缔组织不多 -> 选Ⅰ型（通用）

· 细胞特别娇贵或需要高纯度 -> 选Ⅳ型
*小贴士：很多实验室常用Ⅰ型和Ⅱ型1:1混合的策略，以兼顾消化效率和细胞活性。

配置方法

储存液配制：

1、溶解‌将胶原酶干粉加入含Ca²⁺/Mg²⁺的HBSS或基础培养液（如100 mg酶粉加4.5 ml HBSS）‌。震荡至完全溶解，避免剧烈搅拌‌。‌

2、除菌与分装‌用0.22 μm滤膜过滤除菌‌。分装后于-20℃避光保存，避免反复冻融‌。

工作液配制：

1、常用浓度‌：一般组织消化：200 U/ml或0.1–0.3 mg/ml‌2。脂肪组织：0.75 mg/ml PBS‌4。‌

2、稀释方法‌按需将储存液用DMEM、PBS等稀释至工作浓度‌。