Western Blot条带总对不齐？可能选错了蛋白Marker

非预染蛋白Marker在电泳过程中看不到，电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用，无法在实验过程中起预示作用。

但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，所以最准确。你的Western Blot条带总对不齐？可能是第一步就选错了蛋白Marker！

蛋白Marker主要分为未预染蛋白Marker和预染蛋白Marker两种，另外还有一些其他类型的蛋白Marker：如显影蛋白Marker等。

 

未预染蛋白Marker

非预染蛋白Marker在电泳过程中看不到，电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用，无法在实验过程中起预示作用。但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子，所示大小正好是蛋白原本的大小，所以最准确。

 

预染蛋白Marker

是纯化好的几种蛋白，通过与染料共价耦联后混合在一起，在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到的一种蛋白Marker。

预染蛋白Marker又可分为单色预染和多色预染。

Marker条带越多参考价值越大，同时也越难区分，若用不同颜色则容易辨认；单色的Marker通常利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小。

预染蛋白Marker在电泳过程可以起到预示作用，当观察目标蛋白大小位置进入最佳分辨区时，停止电泳，以得到最佳分辨效果。

转膜过程可以监测转膜效率，同时可以在膜上标记蛋白分子量。

但是，预染蛋白Marker与染料共价偶联，在不同的缓冲条件下，电泳迁移特性可能会发生某些变化，导致一些偏差。

也就是说，预染蛋白Marker条带代表的是相对大小，而不是绝对大小。

 

显影蛋白Marker
显影蛋白Marker，蛋白条带中含有IgG结合位点，IgG结合位点会结合用于检测靶蛋白的一抗或二抗，使得蛋白Marker在印迹膜上可与目的条带一同呈现。

通常会有两个预染条带，便于动态观察蛋白质电泳状态，判断转膜效果和方向；结合抗体后经化学发光检测可显示多个条带。