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联硕生物-小朱
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1128 人阅读发布时间:2023-09-27 14:52
步骤如下:
1.取适量细胞(一般六孔板的一个孔的细胞)加1毫升Trizol,室温震荡3-5min,室温静置10min。
2.加入250微升氯/仿(这个比例是4:1,前一步是1ml,氯/仿就加 250ul),摇匀,摇成粉白色,然后室温静置15min。
3.4摄氏度,12000rpm 离心 15min。
4.吸上清(一定要小心,不能有一点点沉淀,吸完上清之后要对着光看是透明偏黄就可以了,如果有粉色就不行),沉淀是不要的部分。
5.向上清中加入500微升异丙醇(异丙醇的作用是沉淀RNA),摇匀室温静置15min或者-40摄氏度过夜。
6.4摄氏度,12000rpm 离心 15min。
7.离心完之后就可以看到白色沉淀(RNA)了,去掉上清,留沉淀,加入1ml 75%乙醇(用DEPC水稀释的,DEPC水是一种无RNAase, DNAase的水)洗RNA(要认真盯着你的白色沉淀,不要被吸走或者倒走)。
8.4摄氏度,10000rpm 离心 10min。
9.去掉上清,留RNA沉淀,找干净的位置晾干(凉至RNA沉淀半透明)即可用30-50微升(根据沉淀多少而定)DEPC水溶解RNA。
10.测RNA浓度,立即使用或者-80摄氏度冰箱保存。