- 移动端
浙江联硕生物科技有限公司
9 年
手机商铺
商家活跃：
产品热度：
- NaN
- 0
- 0
- 2
- 2
浙江联硕生物科技有限公司
入驻年限：9 年
- 联系人：
联硕生物-小朱
- 所在地区：
浙江 嘉兴市 南湖区
- 业务范围：
试剂、抗体、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、实验室仪器 / 设备、耗材、技术服务
- 经营模式：
生产厂商 代理商
推荐产品
公司新闻/正文
小鼠肿瘤坏死因子α试剂盒的原理和操作步骤
415 人阅读发布时间：2023-08-23 16:29
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。
试剂盒工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中小鼠肿瘤坏死因子α水平。向预先包被了小鼠肿瘤坏死因子α单克隆抗体的酶标孔中加入小鼠肿瘤坏死因子α，温育；温育后，加入生物素标记的抗小鼠肿瘤坏死因子α抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中小鼠肿瘤坏死因子α的浓度呈正相关。
实验操作步骤
1. 从室温平衡30min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.加样：1）空白孔，空白对照孔只加显色剂A&B和终止液。其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul；3）待测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul；
3.盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
4. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置30秒，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
5. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
6. 每孔加入终止液50μL，10min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
7.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
试剂盒工作原理
本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中小鼠肿瘤坏死因子α水平。向预先包被了小鼠肿瘤坏死因子α单克隆抗体的酶标孔中加入小鼠肿瘤坏死因子α，温育；温育后，加入生物素标记的抗小鼠肿瘤坏死因子α抗体。再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中小鼠肿瘤坏死因子α的浓度呈正相关。
实验操作步骤
1. 从室温平衡30min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.加样：1）空白孔，空白对照孔只加显色剂A&B和终止液。其余各步操作相同；2）标准品孔：加入标准品50ul，链霉亲和素-HRP50ul；3）待测样品孔：加入样本40ul，然后各加入抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul；
3.盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
4. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置30秒，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
5. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
6. 每孔加入终止液50μL，10min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
7.根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。