用溴甲.酚紫法测定白蛋白含量的流程

实验原理

溴甲.酚紫法（BCP法）是一种测定白蛋白含量的方法。实验原理为在pH5.2的缓冲液中，有Brij-35存在时，溴甲.酚紫(bromocresol puple，BCP)可与白蛋白结合形成绿色复合物，在波长603nm处的吸光度与白蛋白浓度成正比例，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清中白蛋白含量。

实验原理

在pH5.2的缓冲液中，有Brij-35存在时，溴甲.酚紫(bromocresol puple，BCP)可与白蛋白结合形成绿色复合物，在波长603nm处的吸光度与白蛋白浓度成正比例，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清中白蛋白含量。

试剂与器材

1．250g/LBrij-35溶液见BCG法

2．50mmol/L BCP贮存液称取BCP 675mg溶于无水乙醇15ml中，当溶液变为橙色透明时，用无水乙醇稀释至25ml。置4C冰箱保存至少可稳定3个月。

3．2.5mol/L醋.酸溶液量取冰醋.酸150ml用蒸馏水稀释至1L。

4．BCP试剂称取无水醋酸钠6.03g（或三结晶水的醋酸钠10g）溶于蒸馏水950ml中，加Brij-35液1ml，BCP贮存液1ml，用2.5mol/L醋.酸溶液调pH至5.20+0.03（约需10ml），加蒸馏水至1L（BCP贮存液也可在调好pH后再加）。在室温可稳定一周。

5．0.154mol/L NaCl溶液称取NaCl9g用蒸馏水溶解至1L。

6．白蛋白标准液采用人白蛋白或定值，切不可用动物血清蛋白。

操作步骤

1．生化自动分析仪分析法参数见有关仪器操作说明书。

2．手工操作法。

混匀，1min后在波长603nm处比色，用空白管调零，读取测定管和标准管吸光度。

评价

本法反应最适pH为5.20，接近α-和β-球蛋白的等电点，抑制了这两种球蛋白与BCP的非特异性反应，故对测定白蛋白具有高特异性。此外，BCP与白蛋白的反应为即时完全反应，不受时间和温度变化的影响，呈色后稳定1h以上。本法线性范围5-50g/L,在10-40g呈线性良好,50g/l时稍偏低；CV为0.45%;回收率99.3%~102%,平均回收率100.5%.本法兼有BCG法的主要优点，克服了BCG法的多数缺点，与火箭电泳法结果相一致，成为测定血清白蛋白燃料结合法中较好的一个方法。BCP与牛，猪（新鲜或冻干）血清反应性仅为BCG反应的1/3，不适用于动物血清白蛋白作质量控制，机制尚待阐明。