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公司新闻/正文
尿苷二磷酸葡萄糖的制备
387 人阅读发布时间：2021-11-01 14:01
制备及其进展
方法：提取基因组DNA作为模板，通过PCR扩增得到酶基因，经DNA体外重组构建表达质粒。结果：实现在大肠杆菌中的表达，并成功转化黄原胶菌株。转化过程提示黄原胶菌株可能具有某些特殊性。
建立了一种经济、简便的一步酶法，大量合成尿苷二磷酸葡萄糖。在酶法合成中，用UTP代替ATP，并建立了UTP的再生系统；建立了反复补加法和酶回收法，使酶的利用率达到最高。
黄原胶是由野油菜黄单胞菌（Xanthomonascampestris）分泌的胞外杂多糖，是目前产量最高的微生物多糖之一，具有假塑性、温度和pH稳定性，以及与盐类良好的相容性，广泛应用于食品、石油、化工、医药等领域。国外关于黄原胶的研究从20世纪60年代起步，国内自70年代开始，包括菌种选育、发酵工艺研究、黄原胶理化性质探讨及其免疫学活性分析等。经查阅资料发现，在黄原胶的合成过程中，含糖的底物需要尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶（uridinediphosphateglucosedehydrogenase，UDPGD）的催化才能生成葡萄糖醛酸，而后者是黄原胶生物合成的前体之一。故此，我们设想以黄原胶菌株基因组DNA为模板，通过合成引物、扩增、克隆得到UDPGD基因，在实现大肠杆菌的表达后，再转入原黄原胶菌株，希望UDPGD酶量的增加能够带来黄原胶产量增加的正效应。文献报道UDPGD基因全长1338bp，285bp处含PstⅠ切点，740bp处含BamHⅠ切点，编码445个氨基酸，蛋白相对分子质量48432。经过实验，我们对UDPGD的研究工作取得了初步结果。
方法：提取基因组DNA作为模板，通过PCR扩增得到酶基因，经DNA体外重组构建表达质粒。结果：实现在大肠杆菌中的表达，并成功转化黄原胶菌株。转化过程提示黄原胶菌株可能具有某些特殊性。
建立了一种经济、简便的一步酶法，大量合成尿苷二磷酸葡萄糖。在酶法合成中，用UTP代替ATP，并建立了UTP的再生系统；建立了反复补加法和酶回收法，使酶的利用率达到最高。
黄原胶是由野油菜黄单胞菌（Xanthomonascampestris）分泌的胞外杂多糖，是目前产量最高的微生物多糖之一，具有假塑性、温度和pH稳定性，以及与盐类良好的相容性，广泛应用于食品、石油、化工、医药等领域。国外关于黄原胶的研究从20世纪60年代起步，国内自70年代开始，包括菌种选育、发酵工艺研究、黄原胶理化性质探讨及其免疫学活性分析等。经查阅资料发现，在黄原胶的合成过程中，含糖的底物需要尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶（uridinediphosphateglucosedehydrogenase，UDPGD）的催化才能生成葡萄糖醛酸，而后者是黄原胶生物合成的前体之一。故此，我们设想以黄原胶菌株基因组DNA为模板，通过合成引物、扩增、克隆得到UDPGD基因，在实现大肠杆菌的表达后，再转入原黄原胶菌株，希望UDPGD酶量的增加能够带来黄原胶产量增加的正效应。文献报道UDPGD基因全长1338bp，285bp处含PstⅠ切点，740bp处含BamHⅠ切点，编码445个氨基酸，蛋白相对分子质量48432。经过实验，我们对UDPGD的研究工作取得了初步结果。