浙江联硕生物科技有限公司
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- 联系人：
联硕生物-婷婷
- 所在地区：
浙江 嘉兴市 南湖区
- 业务范围：
试剂、抗体、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、实验室仪器 / 设备、耗材、技术服务
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建议收藏！做 ELISA 实验，这些技巧少不了！
人阅读 发布时间：2020-11-26 09:00
介绍：
ELISA 试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA 检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是 ELISA 检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
Elisa 生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
特点：
1. 高效、灵敏、特异的抗体。
2. 稳定的重复性和可靠性。
3. 吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体。
4. 适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。
5. 节省实验经费。
操作方法：
1. 标准品的稀释，请按照说明书进行操作。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样：不规范的移液操作可能带来误差。
1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗 NE 抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂 A&B 和终止液，其余各步操作相同；
2）标准品孔：加入标准品 50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；
3）待测样品孔：加入样本 40ul，然后各加入抗 NE 抗体 10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃ 温育 60 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂 A50ul，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色 15 分钟。
7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 10 分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的 OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
洗板方法：
一、手工洗板方法：
甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少 0.35 ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。
二、自动洗板：
如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
注意事项
1. 从 2-8℃ 取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
3. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
4. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5. 不同批次试剂盒不能混用，如遇试剂不够，请及时联系客服解决
6. 底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。
7. 中、英文说明书或许会有不一致之处，请以英文说明书为准。
8. 保存温度：2-8℃。
9. 有效期：6 个月 (2-8℃)。
咨询电话：400-0918-500
客服电话：13917838824
邮箱：lianshuo@vip.126.com
ELISA 试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA 检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是 ELISA 检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
Elisa 生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
特点：
1. 高效、灵敏、特异的抗体。
2. 稳定的重复性和可靠性。
3. 吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体。
4. 适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种标本类型。
5. 节省实验经费。
操作方法：
1. 标准品的稀释，请按照说明书进行操作。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加样：不规范的移液操作可能带来误差。
1）空白孔，空白对照孔不加样品，生物素标记的抗 NE 抗体，链霉亲和素-HRP，只加显色剂 A&B 和终止液，其余各步操作相同；
2）标准品孔：加入标准品 50ul，链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加)；
3）待测样品孔：加入样本 40ul，然后各加入抗 NE 抗体 10ul、链霉亲和素-HRP50ul，盖上封板膜，轻轻震荡混匀，37℃ 温育 60 分钟。
4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
6. 显色：每孔先加入显色剂 A50ul，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色 15 分钟。
7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 10 分钟以内进行。
9. 根据标准品的浓度及对应的 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的 OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。
洗板方法：
一、手工洗板方法：
甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少 0.35 ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。
二、自动洗板：
如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
注意事项
1. 从 2-8℃ 取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
3. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
4. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。
5. 不同批次试剂盒不能混用，如遇试剂不够，请及时联系客服解决
6. 底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。
7. 中、英文说明书或许会有不一致之处，请以英文说明书为准。
8. 保存温度：2-8℃。
9. 有效期：6 个月 (2-8℃)。
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