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捕获法测抗体和捕获包被法检测抗体

2286 人阅读发布时间:2019-08-09 09:50

捕获包被法(亦称反向间接法)ELISA,首要用于血清中某种抗体亚型成分(如 IgM)的测定。以目前最常用的 IgM 测定为例,因血清中针对某种抗原的特异性 IgM 和 IgG 同时存在,则后者可搅扰 IgM 的测定。因此先将一切血清 IgM(包括异性 IgM 和非特异性 IgM)固定在固相上,在去除 IgG 后再测定特异性 IgM。IgM 抗体的检测用于流行症的前期确诊中。先用抗人 IgM 抗体包被固相,以捕获血清标本中的 IgM(其间包括针对抗原的特异性 IgM 抗体和非特异性的 IgM)。然后参加抗原,此抗原仅与特异性 IgM 相结合。继而加酶符号针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的 IgM 成正相关。此法常用于病毒性感染的前期确诊。类风湿因子(RF)相同能搅扰捕获包被法测定 IgM 抗体,导致假阳性反响。因此中和 IgG 的间接法近来颇受喜爱,用这类试剂检测抗 CMV IgGM 和抗弓形虫 IgM 抗体已获成功。

捕获法测抗体的扼要操作过程:    
1)特异性捕获抗体的包被,先把能特异性结合待测抗原的抗体固定于固相载体外表;    
2)参加待测样品,通过固定在载体外表的针对该抗原的抗体固定于载体外表;    
3)参加特异性抗原以及针对该特异性抗原的酶标抗体;    
4)参加酶促反响底物,发作显色反响,显色的深浅与待测抗体的量成正比。

近年在亲和素 - 生物素体系上又发展出 ABS-ELISA 法。亲和素是一种糖蛋白,每个分子由 4 个能和生物素结合的亚基组成,生物素为小分子化合物。用化学办法制成的衍生物素 - 羟基琥珀酰亚胺酯可与抗体或酶构成生物素符号产品,符号办法颇为简洁,并且不影响抗体或酶原有的生物学活性。亲和素生物素体系,简称 ABS(avidin-biotin system)因为亲和素与生物素间的亲和力极强,结合迅速,且极端安稳,使 BAS 符号技能比惯例酶联免疫、放射免疫及荧光免疫技能有着更高的灵敏度,为微量抗原、抗体的检测拓荒了新的途径,大大提高了检测的灵敏度,但该办法比一般 ELISA 多用了两种试剂,增加了操作过程,因此在临床查验中 ABS-ELISA 使用不多。ABS-ELISA 法可分为酶符号亲和素 - 生物素(LAB)法和桥联亲和素 - 生物素(ABC)法两种类型。两者均以生物素符号的抗体(或抗原)代替原 ELISA 体系中的酶标抗体(抗原)。

在 LAB 法中,将特异性抗体生物素化、酶分子符号在亲和素分子上,生物素化抗体与被检抗原结合后,再借 BAS 的高度亲和力将酶分子联结到抗原分子上,经酶促反响即可检出抗原,因此提高检测的敏感度。

ABC 法相同将特异性抗体生物素化、酶分子标在生物素上,亲和素和酶标生物素需要先按必定比例构成 ABC 复合物,这种网络结构结合了很多的酶分子,当亲和素尚未被酶标生物素饱满时,生物素化抗体即可与之结合,使被检抗原、生物素化抗体和酶标生物素联成一体。

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