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细菌RNA提取试剂盒

人阅读 发布时间:2021-09-14 11:39

 
细菌RNA提取试剂盒说明书
RNApure Bacteria Kit
细菌RNA提取试剂盒

Cat. No.   K0536
保存:室温

组分说明

                                              Cat. No.              K0536
                                              Kit Size                 50
                                             Buffer RL               35 ml
                                            Buffer RW1               40 ml
                                    Buffer RW2concentrate)          11 ml
                                        RNase-Free Water             10 ml
                                      Shredder Spin column             50
                                         Spin Column RM                50
                                    Collection Tube1.5 ml)            50
                                     Collection Tube2 ml)            100

产品简介

     本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从细菌或培养的动物细胞中快速提取总RNA
30-40 分钟内即可完成反应。提取的总 RNA 纯度高,没有蛋白质和其他污染,如果是对微量DNA 非常敏感的RNA 实验,残留的DNA 可利用无 RNase DNase I 在柱上进行消化去除。提取的RNA 适用于RT-PCRReal-Time RT-PCR、芯片分析、体外翻译等实验。

注意事项

1.预防RNase污染,应注意以下几方面:
1)使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
2. 提取的样品避免反复冻融,否则影响 RNA 提取的量和质量。

3. 使用前请检查 Buffer RL 是否出现结晶或者沉淀,可置于 56℃水浴重新溶解。Buffer RL 在使用前请加入β-巯基乙醇,
    至终浓度为 1%。如 1 ml Buffer RL 10 μl  β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的 Buffer RL 室温可保存 1 个月。

4. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer RW2 中加入无水乙醇。
5. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行,且所有操作步骤动作要迅速。

6. 若下游实验对 DNA 非常敏感,建议用不含 RNase DNase I(货号:CW2090A)对 RNA 进行处理。

自备试剂:LysozymeCW0887)、TE缓冲液、β-巯基乙醇、无水乙醇(新开封或提取RNA专用)  


操作步骤

 1. 4℃  10,000 rpm~13,400×g)离心2分钟收集菌体(菌体量最大不超过1×109 ),小心去除所有上清。
     注意:上清如果有残留,会影响后续的消化过程。

 2. 用含有Lysozyme100  μl TE缓冲液彻底重悬菌体,室温孵育。具体配方和孵育时间如下:

TE 缓冲液中 Lysozyme 的终浓度               孵育时间

G 细菌                  400  μg/ml               3-5 分钟
                          -
G+ 细菌                             3 mg/ml                      5-10 分钟
 
3. 加入350  μl Buffer RL(使用前请检查是否加入β-巯基乙醇),涡旋震荡混匀(此步骤可能出现不溶性沉淀)。将溶液与沉淀全部加入到已装入收集管(Collection Tube 2 ml)的过滤柱(Shredder Spin Column)中,10,000 rpm离心2分钟,收集滤液,弃掉过滤柱。

 4. 向上步得到的滤液中加入250  μl无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。将得到的溶液和沉淀一起转入到已装入收集管(Collection Tube 2 ml)的吸附柱(Spin Column RM)中,10,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
 5. 向吸附柱中加入700  μl Buffer RW110,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
可选步骤:如果要进行对微量DNA非常敏感的RNA实验,则用以下步骤替代步骤5
     1)向吸附柱中加入350  μl Buffer RW110,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

     2)配制DNase I  混合液:取52 μl RNase-Free Water,向其中加入8  μl 10 × Reaction Buffer  20 μl DNase I1 U/μl),混匀,  配制成终体积为80  μl的反应液。

       注意:  以上体系为按照我公司产品DNase I YJ2090A)反应体系进行配置,应用其他公司产品请参考相应说明书。
    3)向吸附柱中直接加入80 µl DNase I  混合液,20-30℃孵育15分钟。
    4)向吸附柱中加入350  μl Buffer RW1, 10,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
 6. 向吸附柱中加入500  μl Buffer RW2(使用前检查是否加入无水乙醇), 10,000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。
 7. 重复步骤6
 8. 12,000 rpm 离心 2 分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
     注意:这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除,乙醇残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR)
 9. 将吸附柱置于一个新的无RNase的离心管(Collection Tube 1.5 ml)中,向吸附柱的中间部位加入30-50  μl
      RNase-Free Water,室温放置1分钟,10,000 rpm离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。
注意:1)  RNase-Free Water 体积不应小于 30 μl,体积过小影响回收率。

2)如果要提高RNA的产量,可用30-50 μl新的RNase-Free Water重复步骤9

3)如果要提高RNA浓度,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,重复步骤9
实验代做服务:
 
试剂盒免费代测 WB实验代做 探针合成 透射电镜服务 激光共聚焦
动物模型实验 原位杂交(FIsh HE染色 扫描电镜服务 免疫荧光染色
酶活性检测 钙离子浓度检测实验 DNA甲基化 免疫共沉淀(CHIRP)实验 划痕(修复)实验服务
CCK8实验服务 网状纤维染色银染实验 凝胶迁移或电泳迁移率EMSA
PKC活性检测实验
凋亡因子Caspase-389检测实验
石蜡冰冻切片TUNEL凋亡荧光 免疫组化IHC染色实验 免疫共沉淀(Co-IP)实验 蛋白双向2D-WB 电泳实验服务 免疫细胞化学ICC

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