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G422细胞培养说明书

人阅读 发布时间:2018-10-20 20:21

小鼠脑神经胶质母细胞瘤细胞 (G422)
货号:MNCL-011

细胞介绍
1964年建株;甲基胆蒽植入Km小鼠脑内诱发星形细胞瘤,传至第120代后转为胶质细胞瘤;瘤细胞悬液同系小鼠皮下、肌肉、脑内移植,成功率皆100%。肌肉及脑内移植可形成较规律的移植性瘤株,存活时间脑内型15.9±4.8天;肌肉型20.3±6.6

细胞特性
  1. 来源:星形细胞瘤
  2. 形态上皮细胞贴壁生长
  3. 含量:>1x106 /mL
  4. 污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
  5. 规格:T25或者1mL冻存管包装

细胞接受后的处理:
  1. 收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
  2. 请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25置于37培养约2-3h
  3. 弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
  4. 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
  5. 接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。

细胞用途:仅供科研使用。
                       
本公司细胞培养操作规程,供参考
一.培养基培养冻存条件准备:
  1. 准备DMEM培养基(DMEMGIBCO,货号11995-065)90%;优质胎牛血清,10%
  2. 培养条件 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%
  3. 冻存液90%血清10%DMSO现用液氮储存。
  • 细胞处理
  1. 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
  2. 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2
  2. 2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA培养瓶中,置于37培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加3ml此细胞的培养基终止消化
  3. 轻轻打后吸出,移入15ml离心管中,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养液后吹匀。
  4. 移入到事先准备好的含有5ml培养基T-25培养瓶中或含有14ml培养基T-75培养瓶中培养
3)细胞冻存:细胞生长状态良好时,进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,先要消化处理并进行细胞计数消化方法按照细胞传代方法的1-3骤进行,最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心,用血清重悬浮DMSO最终浓度为10%加入DMSO迅速混匀,按每1ml数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106细胞冻存。

注意事项:
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系
2. 所有动物细胞均视为潜在的生物危害性必须在二级生物安全内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。


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