上海研谨生物科技有限公司
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技术资料/正文
DRG 大鼠背根神经细胞
157 人阅读发布时间:2020-08-26 19:22
DRG 大鼠背根神经细胞
Product Format: a T25 flask
Culture Properties:贴壁
Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item | Specifications |
a T25 flask | 2X106 |
Manual | 1 copy |
Operation steps for cell culture
- 吸走多余培养基,加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞;
- 吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面,培养瓶放37度培养箱消化;
(细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落,可以轻轻吹下时即可终止,禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔,不要吹出大量气泡。) - 加入6-8ml完全培养基终止消化,轻轻吹下细胞混匀;
- 将混匀的细胞1000rpm(约150g)离心3min,弃上清,再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养;
Cell cryopreservation
1.冻存液:92%完全培养基+8%DMSO(可以根据实验室条件自行选择)
2.降温步骤:4度10min,-20度2h,-80过夜后液氮保存。
Tips:
- 细胞经过运输后,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900-1000rpm(约150g)离心3min,弃上清。加5ml PBS重悬细胞,再900-1000rpm(约150g)离心3min,用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议PBS多洗几次。
- 细胞生长不均时,可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
- 细胞生长缓慢时,可以选择提高血清浓度培养(最高不超过20%),也可以根据细胞生长状态,选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。