IM9 人外周血B淋巴细胞

221 人阅读发布时间：2020-04-21 16:30

IM9 人外周血B淋巴细胞

Product Format: a 15 ml centrifuge tube
Culture Properties：悬浮
Complete Growth Medium: 89%1640+10%FBS+1%双抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

Components

Item	Specifications
a 15 ml centrifuge tube	2X10⁶
Manual	1 copy

Operation steps for cell culture

轻轻吹匀细胞，收集悬液1000rpm(150g左右)离心3min，弃上清；
用新的完全培养基重悬细胞，均匀分为几份，接种到新的培养瓶中，并补加足量的完全培养基；

（悬浮细胞比较依赖细胞密度，细胞传代前及传代后密度不宜过低，过低可能会导致细胞生长缓慢或者死亡。细胞传代前培养基不能完全变黄，不然细胞状态变差会导致传代失败。传代过程吹打细胞应尽量轻柔，不应吹出过多气泡。）

将细胞放回37度培养箱继续培养。

传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。
Cell cryopreservation

冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）
降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。

Tips：

细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。加5ml PBS重悬细胞，再900-1000rpm(约150g)离心3min，用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（最高不超过20%），也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。

不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min均有可能，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞完全漂浮。

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资料格式：

IM9 悬浮离心管.pdf

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