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技术资料/正文
蛋白表达-大肠杆菌原核表达纯化
13 人阅读发布时间：2021-06-16 17:28
1、项目简介
大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早，目前应用最广泛的经典表达系统。与其它表达系统相比，大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚，目的基因表达水平高，培养周期短，抗污染能力强等特点。在基因表达技术中占有重要的地位，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。
2、流程介绍
3、名词解释
质粒：在这里主要指载体质粒，是目的基因的载体，由细菌质粒改造得到，是一种环状DNA。其也会决定转化后菌株的抗性。
表达菌株（宿主）；用于翻译表达转化进细胞的质粒上的目的基因的菌株，以诱导剂的方式启动表达。Rosetta（DE3）、BL21（DE3）、Origami（DE3）、AE（DE3）等。
克隆菌株（宿主）：用于保存与复制转化进细胞的质粒的菌株。Top10、DH5α等。
抗生素筛选：利用目的质粒上的抗生素抗性，将不含有目的质粒的宿主细胞杀死，只留下含有目的质粒的宿主细胞的过程。(也叫单压力筛选，只有抗生素作为唯一生长压力。)
诱导：用诱导剂或培养环境诱导启动表达宿主翻译表达质粒上的目的基因。
(DE3类大肠杆菌用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂，是利用IPTG在结构上与乳糖的相似性启动乳糖操纵子,将其作为目的基因的启动子但IPTG不会被细胞代谢掉，所以可以持续的发挥作用。）
破菌上清：将菌体细胞破碎后渗出的上清液体。
包涵体：将菌体细胞破碎后留下的沉淀，包含细胞膜碎片、细胞器碎片、游离的固体蛋白聚合体。
蛋白纯化：这里特指亲和纯化，即在温和条件（防止蛋白变性、破碎、降解的条件）下将目的蛋白分离出来的过程。
大肠杆菌表达系统是基因表达技术中发展最早，目前应用最广泛的经典表达系统。与其它表达系统相比，大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚，目的基因表达水平高，培养周期短，抗污染能力强等特点。在基因表达技术中占有重要的地位，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。
2、流程介绍
3、名词解释
质粒：在这里主要指载体质粒，是目的基因的载体，由细菌质粒改造得到，是一种环状DNA。其也会决定转化后菌株的抗性。
表达菌株（宿主）；用于翻译表达转化进细胞的质粒上的目的基因的菌株，以诱导剂的方式启动表达。Rosetta（DE3）、BL21（DE3）、Origami（DE3）、AE（DE3）等。
克隆菌株（宿主）：用于保存与复制转化进细胞的质粒的菌株。Top10、DH5α等。
抗生素筛选：利用目的质粒上的抗生素抗性，将不含有目的质粒的宿主细胞杀死，只留下含有目的质粒的宿主细胞的过程。(也叫单压力筛选，只有抗生素作为唯一生长压力。)
诱导：用诱导剂或培养环境诱导启动表达宿主翻译表达质粒上的目的基因。
(DE3类大肠杆菌用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)作为诱导剂，是利用IPTG在结构上与乳糖的相似性启动乳糖操纵子,将其作为目的基因的启动子但IPTG不会被细胞代谢掉，所以可以持续的发挥作用。）
破菌上清：将菌体细胞破碎后渗出的上清液体。
包涵体：将菌体细胞破碎后留下的沉淀，包含细胞膜碎片、细胞器碎片、游离的固体蛋白聚合体。
蛋白纯化：这里特指亲和纯化，即在温和条件（防止蛋白变性、破碎、降解的条件）下将目的蛋白分离出来的过程。