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葡萄糖氧化酶的作用及酶学性质
人阅读 发布时间:2021-07-21 15:01
葡糖氧化酶(Glucose oxidase ,GOD),是用金黄色青霉菌进行深层通风发酵,用乙醇、丙酮使之沉淀和高岭土或氢氧铝吸附后再用硫酸铵盐析、精制而得。亦可用点青霉以及黑曲霉制得。近乎白色至浅黄色粉末,或黄色至棕色液体。溶于水,水溶液一般呈淡黄色。几乎不溶于乙醇、lv仿和乙醚。
是食品工业中一种重要的工业用酶, 广泛用于葡萄酒、啤酒、果汁、奶粉等食品脱氧、面粉改良、防止食品褐变等方面, 在食品快速检测及生物传感器上也有广泛应用。GOD广泛分布于动植物和微生物体内。由微生物生长繁殖快、来源广,是生产GOD的主要来源,主要生产菌株为黑曲霉和青霉。
一、GOD的抗氧化作用机制:
GOD能消耗分子氧或原子氧氧化葡萄糖,保护食品中的易氧化成分。按反应条件GOD催化反应有3种形式:
( 1)没有过氧化氢酶存在时,每氧化1 mol葡萄糖消耗1 mol氧:C6H12O6+O2→C6H12O7+H2O2 ;β-D-葡萄糖+ O2→β-D-葡糖内酯+ H2O2 ;
( 2)有过氧化氢酶存在时,每氧化1 mol葡萄糖消耗1/2 mol氧:C6H12O6+O2→C6H12O7+H2O2 ;
( 3)有乙醇及过氧化氢酶存在时,过氧化氢酶可用于乙醇的氧化,每氧化1 mol葡萄糖消耗1 mol氧:C6H12O6+ C2H5OH+O2→C6H12O7+ CH3CHO +H2O2 。
此外, GOD对β-D-葡萄糖表现出强烈的特异性,葡萄糖分子C(1)上的羟基对酶的催化活性至关重要,且羟基处于β位时的活性要比在α位时高约160倍。底物C(2), C(3), C(4),C(5), C(6)结构的改变也会大大影响其酶活性,但酶活性仍有部分保留。葡萄糖氧化酶对L-葡萄糖和2-O-甲基-D-葡糖则完全没有活性。
二、GOD的结构和酶学性质:
1、酶的结构
GOD是同型二聚体分子,含有2个黄素腺嘌呤二核苷酸( FAD)结合位点。每个单体含有2个完全不同的区域:一个与部分FAD非共价但紧密结合,主要为β折叠;另一个与底物β-D-葡萄糖结合,由4个α-螺旋支撑1个反平行的β折叠。
2、酶学性质
高纯度GOD为淡黄色晶体,易溶于水,可制成液体制剂。 GOD完全不溶于乙醚、lv仿、丁醇、吡啶、甘油、乙二醇等有机溶剂。 GOD相对分子质量一般在1.5×105左右,每分子酶含2分子FAD。 pH作用范围3.5~6.5,最适pH 5.0左右,在没有保护剂存在的条件下pH >8.0或pH <3.0时会迅速失活。GOD的作用温度范围一般为30~60 ℃。固体酶制剂在0 ℃下至少可保存2年,-15 ℃下可保存8年。
是食品工业中一种重要的工业用酶, 广泛用于葡萄酒、啤酒、果汁、奶粉等食品脱氧、面粉改良、防止食品褐变等方面, 在食品快速检测及生物传感器上也有广泛应用。GOD广泛分布于动植物和微生物体内。由微生物生长繁殖快、来源广,是生产GOD的主要来源,主要生产菌株为黑曲霉和青霉。
一、GOD的抗氧化作用机制:
GOD能消耗分子氧或原子氧氧化葡萄糖,保护食品中的易氧化成分。按反应条件GOD催化反应有3种形式:
( 1)没有过氧化氢酶存在时,每氧化1 mol葡萄糖消耗1 mol氧:C6H12O6+O2→C6H12O7+H2O2 ;β-D-葡萄糖+ O2→β-D-葡糖内酯+ H2O2 ;
( 2)有过氧化氢酶存在时,每氧化1 mol葡萄糖消耗1/2 mol氧:C6H12O6+O2→C6H12O7+H2O2 ;
( 3)有乙醇及过氧化氢酶存在时,过氧化氢酶可用于乙醇的氧化,每氧化1 mol葡萄糖消耗1 mol氧:C6H12O6+ C2H5OH+O2→C6H12O7+ CH3CHO +H2O2 。
此外, GOD对β-D-葡萄糖表现出强烈的特异性,葡萄糖分子C(1)上的羟基对酶的催化活性至关重要,且羟基处于β位时的活性要比在α位时高约160倍。底物C(2), C(3), C(4),C(5), C(6)结构的改变也会大大影响其酶活性,但酶活性仍有部分保留。葡萄糖氧化酶对L-葡萄糖和2-O-甲基-D-葡糖则完全没有活性。
二、GOD的结构和酶学性质:
1、酶的结构
GOD是同型二聚体分子,含有2个黄素腺嘌呤二核苷酸( FAD)结合位点。每个单体含有2个完全不同的区域:一个与部分FAD非共价但紧密结合,主要为β折叠;另一个与底物β-D-葡萄糖结合,由4个α-螺旋支撑1个反平行的β折叠。
2、酶学性质
高纯度GOD为淡黄色晶体,易溶于水,可制成液体制剂。 GOD完全不溶于乙醚、lv仿、丁醇、吡啶、甘油、乙二醇等有机溶剂。 GOD相对分子质量一般在1.5×105左右,每分子酶含2分子FAD。 pH作用范围3.5~6.5,最适pH 5.0左右,在没有保护剂存在的条件下pH >8.0或pH <3.0时会迅速失活。GOD的作用温度范围一般为30~60 ℃。固体酶制剂在0 ℃下至少可保存2年,-15 ℃下可保存8年。