SW982细胞：滑膜肉瘤研究的黄金模型与培养精要

SW982人滑膜肉瘤细胞：全面介绍与培养指南

一、 细胞背景与特性

   SW982细胞系是研究滑膜肉瘤（Synovial Sarcoma, SS）这一罕见但极具侵袭性软组织肉瘤的关键体外模型。该细胞系由美国典型培养物保藏中心（ATCC）建立和分发（ATCC编号：HTB-93）。

1. 组织来源： SW982细胞分离自一位46岁白人女性滑膜肉瘤患者的转移性腋窝病灶。这使其成为研究滑膜肉瘤生物学特性、转移机制和治疗反应的宝贵工具。

2. 病理特征： 滑膜肉瘤虽然名称中包含“滑膜”，但并非起源于滑膜组织，而是来源于具有多向分化潜能的原始间叶细胞。其最具特征性的分子标志是染色体易位 t(X;18)(p11.2;q11.2)，导致SS18基因（也称SYT）与SSX基因（SSX1, SSX2, 或 SSX4）发生融合，产生致癌的融合蛋白（如SS18-SSX1/2）。SW982细胞已被证实表达这种特征性的融合基因。

3. 细胞形态： SW982细胞在体外培养时呈现贴壁生长特性。在光学显微镜下观察，其形态主要为上皮样或梭形（肉瘤细胞常见形态），细胞呈多角形或不规则形，胞质丰富，核大且核仁明显。具体形态可能因培养条件和传代状态略有差异。

4. 生物学意义：

   • 疾病模型： SW982细胞是研究滑膜肉瘤发病机制、细胞增殖、侵袭转移、耐药性及寻找潜在治疗靶点的核心体外模型。

   • 分子机制研究： 作为携带SS18-SSX融合基因的细胞系，是研究该融合蛋白如何驱动肿瘤发生发展、影响信号通路（如Wnt, Hedgehog, Notch等）、表观遗传调控和细胞代谢的理想对象。

   • 药物筛选与评估： 广泛用于测试化疗药物、靶向治疗药物、免疫治疗药物以及新型化合物对滑膜肉瘤细胞的杀伤效果和作用机制。

二、 SW982细胞培养指南（全面具体）

成功培养SW982细胞需要严格的无菌操作、合适的培养环境和精确的培养条件。以下是详细的培养方案：

1. 培养基：

   • 基础培养基： DMEM/F12 (Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12)。这种培养基结合了DMEM的高葡萄糖和营养丰富性以及F12的维生素、微量元素和激素成分，特别适合多种贴壁细胞的生长。

   • 血清： 添加 10% (v/v) 胎牛血清。高质量的FBS为细胞提供生长必需的生长因子、激素、脂质和附着因子。血清批次对细胞生长状态可能有影响，建议使用经过测试或信誉良好供应商的血清。

   • 补充剂： 通常不需要额外添加谷氨酰胺（因DMEM/F12通常已含），也无需特殊生长因子。但需添加 1% (v/v) 青霉素-链霉素溶液（100 U/mL 青霉素， 100 µg/mL 链霉素）以防止细菌污染。

   • 配制好的完全培养基： 置于4°C冰箱避光保存，建议在2-3周内使用完毕。

2. 培养环境：

   • 温度： 37°C。这是哺乳动物细胞生长的标准温度。

   • 气体： 5% CO₂。CO₂与培养基中的碳酸氢钠缓冲系统共同作用，维持培养基的生理pH值（约7.2-7.4）。

   • 湿度： 饱和湿度（>95%）。使用培养箱内的水盘或加湿系统维持，防止培养基蒸发。

3. 培养容器：

   • 常用T-25, T-75, T-175细胞培养瓶，或不同规格的培养皿/多孔板（根据实验需求选择）。

   • 培养瓶/皿需预先用0.1%明胶溶液（或其他细胞外基质如胶原）包被，以促进SW982细胞的贴壁和铺展。包被方法：将足够覆盖瓶底的明胶溶液加入培养瓶，室温或37°C孵育30-60分钟，吸弃多余液体，待其稍干（或直接用PBS洗一次）后即可接种细胞。（此步骤非常重要，能显著改善SW982的贴壁状态）

4. 细胞复苏：

   • 从液氮罐中迅速取出冻存管（戴防护面罩和手套）。

   • 立即放入37°C水浴中，轻轻摇晃直至冰晶完全融化（约1-2分钟）。

   • 用75%乙醇彻底擦拭冻存管外壁消毒。

   • 在生物安全柜中，将细胞悬液缓慢滴加到含有5-7 mL 预热完全培养基的15mL离心管中（稀释冻存液中的DMSO）。

   • 轻柔离心（推荐：200 x g, 5分钟）。

   • 弃上清，用适量（如5mL）新鲜预热完全培养基轻柔重悬细胞沉淀。

   • 将细胞悬液接种到预包被好的培养瓶中（推荐复苏接种密度稍高，如T25瓶）。

   • 放入37°C, 5% CO₂培养箱。

   • 复苏后24小时内避免晃动培养瓶，以利于细胞贴壁。

   • 次日观察细胞贴壁情况，更换新鲜培养基（去除死细胞和残留DMSO）。

5. 细胞传代：

   • 时机： 当细胞融合度达到80%-90% 时进行传代。避免过度融合（>95%），否则细胞状态易下滑，且更难消化。

   • 消化液：

     • 推荐：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液 (如含0.53 mM EDTA)。

     • 替代方案： 可使用Accutase溶液，它对细胞膜的损伤可能更小，尤其适合对胰酶敏感的细胞或需要保持表面蛋白完整性的实验。

   • 步骤：

     1. 吸弃旧培养基。

     2. 用预热的PBS或无钙镁离子的平衡盐溶液（如D-PBS）轻柔洗涤细胞1-2次，去除血清（血清会抑制胰酶活性）。

     3. 加入适量预热消化液（如T25瓶加1-2mL），轻轻摇晃确保覆盖所有细胞。

     4. 置于37°C培养箱孵育2-5分钟。密切观察，当大部分细胞变圆、边缘开始脱离瓶底时（在显微镜下观察），立即终止消化。（SW982消化时间需经验积累，过度消化损伤细胞）

     5. 加入等体积或2倍体积的含血清完全培养基（血清中和胰酶/Accutase），轻柔吹打瓶壁数次，使细胞完全脱落，形成单细胞悬液。

     6. 将细胞悬液转移至15mL离心管。

     7. 轻柔离心（200 x g, 5分钟）。

     8. 弃上清，用适量新鲜预热完全培养基轻柔重悬细胞沉淀。

     9. 根据实验需求，按合适比例将细胞悬液接种到新的预包被培养瓶中。推荐传代比例通常为1:3 至 1:6（即一个长满的T25瓶细胞传代到3个或6个新的T25瓶中）。具体比例依据细胞生长速度和所需实验密度调整。

     10. 补充新鲜完全培养基至标准体积（如T25加5-6mL），放回培养箱。

6. 细胞冻存：

   • 时机： 选择对数生长期、状态良好、融合度约80-90% 的细胞。

   • 冻存液配方： 常用配方是 90%完全培养基 + 10% DMSO。也可使用商品化无血清细胞冻存液（需测试效果）。

   • 步骤：

     1. 按传代步骤消化、离心收集细胞。

     2. 用预冷的冻存液重悬细胞，调整细胞密度至5×10⁶ 至 1×10⁷ 个细胞/mL。

     3. 将细胞悬液分装到标记好的无菌冻存管中（通常每管1.0-1.5mL）。

     4. 使用程序降温盒（如Nalgene® Mr. Frosty™），按说明书加入异丙醇，将冻存管放入盒中，置于-80°C冰箱过夜（至少4小时）。此步骤保证细胞以约-1°C/min的速度缓慢降温，减少冰晶损伤。

     5. 次日，将冻存管迅速转移至液氮气相（-150°C至-196°C）或液氮液相中长期保存。（推荐长期保存在液氮液相中）

7. 培养注意事项与常见问题：

   • 无菌操作： 所有操作必须在生物安全柜中进行，严格无菌。定期检查支原体污染。

   • 定期换液： 根据细胞生长速度和培养基颜色变化（酚红指示剂变黄表示酸化），每2-3天更换一次新鲜完全培养基。

   • 观察与记录： 每天在显微镜下观察细胞形态、密度、有无污染迹象（浑浊、菌丝、异常pH变化）。

   • 形态变化： SW982形态在不同培养条件下可能略有变化（上皮样或更梭形），但若出现大量空泡、颗粒增多、极度拉长或漂浮死细胞显著增加，则提示状态不佳或存在污染/应激。

   • 贴壁问题： 预包被是关键。如遇贴壁困难，检查包被效果、消化是否过度（损伤细胞膜）、血清质量、复苏后操作是否过于剧烈。可尝试增加血清浓度（如15%）或更换血清批次。

   • 生长缓慢： 检查培养基/血清是否失效、培养箱条件（温度、CO₂浓度、湿度）是否准确、是否支原体污染、传代比例是否过低导致细胞密度不足。

   • 污染处理： 一旦确认细菌、真菌或酵母污染，建议立即丢弃所有相关培养物，彻底消毒培养箱和工作区域。支原体污染难以察觉但危害极大，需定期检测并丢弃污染细胞株。

三、 质量控制与应用

1. 细胞鉴定： 定期进行短串联重复序列（STR）分析，确认细胞身份无误，排除交叉污染。检测SS18-SSX融合基因的表达（RT-PCR或测序）以确认其滑膜肉瘤特征。

2. 支原体检测： 定期（如每1-2个月或新批次复苏时）使用PCR法、培养法或荧光染色法检测支原体污染。

3. 活力检测： 传代或实验前，可用台盼蓝染色法检测细胞活力（活细胞拒染），确保使用状态良好的细胞。

4. 主要应用领域：

   • 滑膜肉瘤发病机制研究（信号通路、融合蛋白功能、表观遗传学）。

   • 抗肿瘤药物（化疗药、靶向药、免疫治疗药、天然产物）的体外药效学评价（MTT/CCK-8, 克隆形成, 流式凋亡/周期等）。

   • 肿瘤细胞侵袭转移机制研究（Transwell, 划痕实验）。

   • 基因功能研究（过表达、敲低/敲除、CRISPR筛选）。

   • 肿瘤微环境相互作用研究（与成纤维细胞、免疫细胞共培养）。

四、 总结

SW982人滑膜肉瘤细胞系是研究这种侵袭性软组织肉瘤不可或缺的体外工具。其携带特征性的SS18-SSX融合基因，为揭示疾病机制和开发新疗法提供了重要平台。成功的培养依赖于严格的预包被、适宜的培养基（DMEM/F12 + 10% FBS）、优化的消化条件（0.25%胰酶-EDTA或Accutase，短时消化）、合适的传代比例（1:3 - 1:6）以及严谨的无菌操作和质量控制（STR、支原体）。 北京百欧博伟生物技术有限公司致力于为客户提供高质量的细胞资源及相关技术支持，助力滑膜肉瘤及肿瘤研究领域的突破。