PBS使用全攻略：让您的细胞实验更高效、更可靠

        在细胞生物学实验中，磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline, PBS）是最基础、最常用的试剂之一。由于其稳定的pH值和与生理环境的相容性，PBS在细胞培养、免疫染色、细胞洗涤等实验中扮演着不可或缺的角色。本文将详细介绍PBS缓冲液的主要用途、正确使用方法及实验中的注意事项，帮助科研人员更好地利用这一"万能助手"。

---

一、PBS缓冲液的主要用途

1. 细胞洗涤

PBS常用于细胞培养过程中的洗涤步骤，如去除培养基中的血清、代谢废物或未贴壁的细胞，避免杂质干扰后续实验（如流式细胞术、ELISA等）。

2. 免疫染色与固定

在免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）等实验中，PBS用于漂洗细胞或组织样本，去除未结合的一抗或二抗，减少背景信号。此外，PBS也常用于稀释抗体或配制固定液（如4%多聚甲醛）。

3. 细胞传代与重悬

在细胞传代时，PBS可用于冲洗贴壁细胞，去除残余的胰酶或EDTA，避免过度消化对细胞造成损伤。此外，PBS也常用于细胞重悬，便于计数或接种。

4. 稀释试剂与配制缓冲液

由于PBS的渗透压与pH（7.2-7.4）接近生理环境，它常被用作稀释液，用于配制抗体、酶或其他生化试剂。

5. 短期保存样本

PBS可用于短期保存细胞或组织样本（如冰冻切片前的冲洗），避免样本干燥或降解。

---

二、PBS缓冲液的使用方法

1. PBS的配制

实验室常用的PBS配方为：

• NaCl 8 g/L

• KCl 0.2 g/L

• Na₂HPO₄ 1.44 g/L

• KH₂PO₄ 0.24 g/L
  溶解于去离子水中，调节pH至7.2-7.4，高压灭菌或过滤除菌后使用。

注意：若实验对钙、镁离子敏感（如某些细胞培养或酶反应），需使用无钙镁离子的PBS（DPBS）。

2. 实验操作步骤

• 细胞洗涤：吸弃培养基，轻柔加入预热的PBS（37℃），轻摇后吸弃，重复1-2次。

• 免疫染色：固定样本后，用PBS冲洗3次，每次5分钟，以去除残留固定液。

• 样本保存：将组织或细胞短暂浸泡于PBS中，避免长时间存放（PBS不含营养，可能导致细胞死亡）。

---

三、注意事项

1. 无菌操作

• 细胞实验需使用无菌PBS（高压灭菌或0.22 μm滤膜过滤），避免微生物污染。

• 开封后建议分装使用，减少反复冻融或污染风险。

2. pH与渗透压

• 长期存放或反复冻融可能导致pH变化，使用前需检测pH值（尤其对pH敏感的实验）。

• 高浓度PBS可能影响细胞活性，避免长时间接触（如洗涤后尽快进行下一步操作）。

3. 避免过度洗涤

• 某些脆弱细胞（如原代细胞、悬浮细胞）可能因多次离心或PBS洗涤而损伤，需优化洗涤次数和离心力。

4. 特殊实验的适配性

• 若实验涉及钙/镁依赖性反应（如细胞粘附），需选择含钙镁的PBS（如D-PBS）。

• 荧光实验中，避免使用含叠氮hua钠（NaN₃）的PBS（可能淬灭荧光信号）。

---

结语

作为细胞实验中的"万能缓冲液"，PBS的合理使用直接影响实验结果的可靠性。通过掌握其用途、规范操作并注意细节，科研人员可以最大化发挥PBS的作用，确保实验的重复性与准确性。

北京百欧生物技术有限公司 提供高品质P缓冲液及相关细胞实验试剂，助力您的科研探索！