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技术资料/正文

微生物菌种反复冻存危害大?这些方法帮你轻松解决!

124 人阅读发布时间:2025-07-15 09:40

反复冻存对微生物菌种的四大危害

❄️ 细胞损伤与存活率下降

·冰晶破坏:冻融过程中形成的冰晶会刺穿细胞膜和细胞壁

·渗透压失衡:细胞内外水分反复冻结解冻,导致细胞脱水或胀破

·存活率降低:特别是乳酸菌、厌氧菌等冻融敏感菌株

 

🧬 遗传变异风险增加

·反复冻融引发氧化应激,可能导致DNA损伤或突变

·长期积累可能造成质粒丢失、基因表达异常等遗传特性改变

 

⚙️ 代谢功能退化

·关键酶活性下降

·次级代谢产物减少

·特殊生理功能可能丧失

 

🦠 污染风险升高

·频繁操作增加杂菌或真菌污染机会

·操作不当可能导致菌种交叉污染

 

四招解决反复冻存难题

1.优化冻存方法

保护剂选择:

·常规菌种:15%-20%甘油或5%-10%DMSO

·特殊菌种:海藻糖、脱脂牛奶等专用保护剂

冻融技巧:

·快速冷冻:使用程序降温盒或液氮

·缓慢解冻:置于冰上或4℃缓慢融化

分装策略:

·小份分装(0.5-1mL/管)

·建立"只取不返"原则,避免回冻

 

2.替代保存方案

冻干保存:

·制成冻干粉,4℃或常温保存

·保存期可达数年至数十年

超低温保存:

·液氮(-196℃)保存优于-80℃冰箱

短期保存:

·斜面培养基(1-3个月)

·穿刺培养(1-3个月)

 

3.科学菌种管理

定期检测:

·每6-12个月复苏检测

·检查存活率、形态、代谢特性

减少传代:

·从原始冻存管传代不超过5次

建立菌种库:

·分批次冻存

·遵循"先进先出"原则

 

4.特殊菌种特别照顾

·厌氧菌:冻存前用厌氧工作站处理

·极端微生物:根据最适生长条件调整保护剂

 

实用操作指南:分装冻存法

1.将菌液与20%甘油等体积混合

2.分装至冻存管(每管0.5mL)

3.清晰标记菌株名称、日期及代次

4.立即置于-80℃或液氮保存

5.使用时取一管解冻,剩余不再使用

小贴士:建议同时采用两种以上保存方法,确保菌种安全!

 

通过以上方法,不仅能有效解决反复冻存带来的问题,还能延长菌种保存时间,保持菌种优良特性。建议实验室根据自身条件,选择最适合的保存方案。

  微生物菌种查询网是一个专为科研人员进行微生物菌种查询的技术型网站,由包括北京百欧博伟生物技术有限公司在内的多家企事业单位及院所共同打造!网站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司,并由其进行更新维护,会根据资源内容及菌种数量进行不定时更新,旨在将最全面的微生物菌种信息呈现给广大微生物科研技术人员!

  从成立之日至今,微生物菌种查询网已收录并更新的国内外菌种资源达12万余株,其中,国内7万余株,国外4万余枚!网站也对细胞资源信息进行了收录,目前达到了国内外细胞资源总量超过1万余枚,基本可以满足大部分科研人员的查询需求!同时我们也罗列了5千余套培养基配方,部分已以文字的形式免费呈现在网站中!而且我们技术人员已经在对常用质粒载体进行设计构建,并且可提供查询的有400余枚!经过工作人员的不懈努力,网站中的资源信息每天都在增加,信息内容每天都在丰富,方便了大批需要进行微生物查询的科研技术人员,满足了众多企事业单位及科研院所的需求!

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