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124 人阅读发布时间:2025-07-15 09:40
反复冻存对微生物菌种的四大危害
❄️ 细胞损伤与存活率下降
·冰晶破坏:冻融过程中形成的冰晶会刺穿细胞膜和细胞壁
·渗透压失衡:细胞内外水分反复冻结解冻,导致细胞脱水或胀破
·存活率降低:特别是乳酸菌、厌氧菌等冻融敏感菌株
🧬 遗传变异风险增加
·反复冻融引发氧化应激,可能导致DNA损伤或突变
·长期积累可能造成质粒丢失、基因表达异常等遗传特性改变
⚙️ 代谢功能退化
·关键酶活性下降
·次级代谢产物减少
·特殊生理功能可能丧失
🦠 污染风险升高
·频繁操作增加杂菌或真菌污染机会
·操作不当可能导致菌种交叉污染
四招解决反复冻存难题
1.优化冻存方法
保护剂选择:
·常规菌种:15%-20%甘油或5%-10%DMSO
·特殊菌种:海藻糖、脱脂牛奶等专用保护剂
冻融技巧:
·快速冷冻:使用程序降温盒或液氮
·缓慢解冻:置于冰上或4℃缓慢融化
分装策略:
·小份分装(0.5-1mL/管)
·建立"只取不返"原则,避免回冻
2.替代保存方案
冻干保存:
·制成冻干粉,4℃或常温保存
·保存期可达数年至数十年
超低温保存:
·液氮(-196℃)保存优于-80℃冰箱
短期保存:
·斜面培养基(1-3个月)
·穿刺培养(1-3个月)
3.科学菌种管理
定期检测:
·每6-12个月复苏检测
·检查存活率、形态、代谢特性
减少传代:
·从原始冻存管传代不超过5次
建立菌种库:
·分批次冻存
·遵循"先进先出"原则
4.特殊菌种特别照顾
·厌氧菌:冻存前用厌氧工作站处理
·极端微生物:根据最适生长条件调整保护剂
实用操作指南:分装冻存法
1.将菌液与20%甘油等体积混合
2.分装至冻存管(每管0.5mL)
3.清晰标记菌株名称、日期及代次
4.立即置于-80℃或液氮保存
5.使用时取一管解冻,剩余不再使用
小贴士:建议同时采用两种以上保存方法,确保菌种安全!
通过以上方法,不仅能有效解决反复冻存带来的问题,还能延长菌种保存时间,保持菌种优良特性。建议实验室根据自身条件,选择最适合的保存方案。
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