微生物菌种检测取样正确操作规范及注意事项

一、 操作前准备 (Pre-Operation Preparation)

1. 人员培训与资质：

   • 取样人员需经过专业培训，熟悉目标菌种的特性、潜在危害及无菌操作技术。

   • 了解并遵守实验室生物安全规范。

2. 取样计划制定：

   • 明确取样目的（检测、鉴定、保藏等）。

   • 确定目标菌种、取样点（斜面、冻干管、液体培养物、甘油管、菌落等）、取样数量及所需样本量。

   • 评估生物安全风险，确定所需生物安全级别（BSL）及防护措施。

3. 环境准备：

   • 在洁净、无通风干扰的环境中进行（首选超净工作台或生物安全柜）。

   • 提前开启净化设备并运行足够时间（通常≥30分钟）进行自净。

   • 使用前对工作台面进行彻底消毒（如75%酒精或有效消毒剂擦拭）。

4. 物料准备与灭菌：

   • 无菌器具： 准备足量且经灭菌处理的取样工具（如无菌接种环、接种针、无菌吸管、无菌枪头、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿/管/瓶）。

   • 消毒剂： 75%酒精棉球/喷壶、有效表面消毒剂。

   • 标记用品： 防水记号笔、标签（预先写好必要信息：样本编号、名称、日期、操作者等）。

   • 样本容器： 选择合适、无菌、密封性好的容器（如冻存管、离心管、培养瓶），并预先标记。

   • 生物安全装备： 根据风险等级穿戴实验服/防护服、手套（推荐双层）、口罩（必要时N95）、护目镜/面罩。

   • 废弃物容器： 准备盛有消毒液的锐器盒、生物危害废物袋。

   • 记录表格： 准备取样记录单。

---

二、 取样操作流程 (Sampling Procedure)

1. 个人防护与消毒：

   • 穿戴好所有必要的个人防护装备（PPE）。

   • 用75%酒精认真消毒手套表面（尤其是指尖和操作部位）。

2. 工作区消毒：

   • 用消毒剂彻底擦拭工作台面及即将放入工作区的物品外表面（如菌种管、培养基瓶等）。

3. 样本源核对与处理：

   • 仔细核对待取样菌种的标签信息（名称、编号、日期等），确保无误。

   • 液体培养基： 混匀培养物。无菌操作打开容器（管口/瓶口在酒精灯火焰旁快速灼烧灭菌）。

   • 固体培养基（斜面/平板）： 检查菌落形态是否典型、无污染。管口/皿盖在火焰旁灭菌。

   • 冻干管： 严格按说明操作（通常需无菌溶剂复溶）。

   • 甘油管/冻存管： 从低温环境取出后，迅速在冰上操作，避免反复冻融。

4. 无菌取样操作：

   • 核心原则： 所有操作在火焰/风口附近的无菌区域内进行，动作迅速、准确。

   • 使用接种环/针：

     • 手持环/针柄末端，将金属环/针部在酒精灯外焰中烧红灭菌，冷却（可在无菌琼脂边缘或空气中稍冷，避免产生气溶胶）。

     • 打开样本源容器，管口/瓶口快速过火灭菌。

     • 将冷却的环/针轻触目标菌落或伸入液体中蘸取适量样本。

     • 迅速转移至目标容器（如另一斜面、液体培养基、无菌生理盐水管）。

     • 在目标容器内壁或液面下轻轻研磨或涮洗，使菌体分散。

     • 取出环/针，管口/瓶口再次过火灭菌后盖上。

     • 环/针再次烧灼灭菌后放回。

   • 使用无菌吸管/枪头：

     • 打开无菌包装，避免触碰尖端。

     • 吸取适量样本液体。

     • 将液体注入目标容器（管壁缓慢流下，避免飞溅）。

     • 吸管/枪头直接投入盛有消毒液的废液缸/锐器盒。

   • 使用无菌棉签：

     • 用于表面取样或难以用环/针操作的样本。

     • 无菌取出棉签，蘸取少量无菌稀释液（如需要）。

     • 涂抹目标区域。

     • 将棉签头折断或直接放入含适量无菌稀释液或培养基的管中，振荡混匀。

5. 样本密封与标记：

   • 取样后立即盖紧/密封样本容器。

   • 再次核对容器标签信息（名称、编号、日期、操作者），确保清晰、准确、牢固。

6. 温度控制：

   • 对温度敏感的菌种，取样后应立即置于合适的温度环境（如冰盒、特定培养温度）。

   • 如需运输，使用保温箱并配备足够的冷媒（冰袋、干冰等），确保全程温度符合要求。

---

三、 操作后处理 (Post-Operation Handling)

1. 工作区清理：

   • 所有接触过生物材料的物品表面用消毒剂擦拭。

   • 清理台面，丢弃废弃物。

2. 样本处理与储存：

   • 取样后的样本根据检测或保藏要求，立即进行后续处理（如划线、培养、DNA提取）或妥善储存（如冷藏、冷冻）。

   • 确保储存条件（温度、环境）符合菌种特性要求。

3. 废弃物处理：

   • 所有一次性耗材（吸头、棉签、手套等）投入生物危害废物袋。

   • 锐器（针头、碎玻璃等）投入锐器盒。

   • 被污染的器具需进行有效灭菌（高压蒸汽灭菌或化学消毒浸泡）后再清洗或丢弃。

   • 严格按照实验室生物废弃物处理规程操作。

4. 个人消毒：

   • 脱卸PPE前，用消毒剂喷淋手套表面。

   • 按顺序小心脱卸PPE（避免接触污染面），放入生物危害废物袋。

   • 彻底用肥皂和流动水洗手。

5. 记录：

   • 及时、准确、完整地填写取样记录单，包括：

     • 取样日期、时间

     • 操作者姓名

     • 样本源信息（名称、编号、来源）

     • 取样点描述

     • 取样量/方式

     • 目标容器信息（编号、类型）

     • 储存/运输条件

     • 观察到的任何异常情况（如污染迹象、菌苔状态异常）

   • 记录需清晰、可追溯。

---

四、 关键注意事项 (Critical Precautions)

1. 无菌操作至高无上： 这是核心！时刻警惕，所有操作必须在无菌区域内进行，避免说话、咳嗽、快速移动产生气流。手和工具不可触碰非无菌物品后再接触无菌区或样本。

2. 生物安全不容忽视： 严格遵守实验室生物安全规定，正确使用生物安全柜/超净台，穿戴合适的PPE。了解并评估所操作菌种的潜在风险（致病性、传播途径）。

3. 防止交叉污染：

   • 不同菌种间取样，必须更换无菌工具或彻底灭菌。

   • 操作完一个样本，消毒手套和工作区后再操作下一个。

   • 避免样本容器盖错。

4. 样本代表性：

   • 液体培养物取样前务必充分混匀。

   • 固体培养物应选取典型、生长良好的单个菌落或菌苔中心区域。

   • 避免取到培养基或杂质。

5. 工具灭菌与冷却： 接种环/针必须烧灼彻底（直至红热），并充分冷却，以免烫死微生物或引起培养液飞溅。

6. 动作轻柔准确： 避免剧烈动作产生气溶胶（尤其是操作致病菌时）。取样量要适中。

7. 及时标记与记录： “现做现标”，防止混淆。记录是追溯和质量保证的关键。

8. 温度敏感性： 对温度敏感的菌种（如脑膜炎奈瑟菌、某些厌氧菌），从取出到处理/储存必须严格控制温度和时间，避免失活。

9. 冻干管操作： 严格按照制造商说明复溶和取样，避免因操作不当导致菌种失活。

10. 异常情况处理： 发现疑似污染、菌种状态异常或操作失误（如样本打翻），立即停止操作，按规程报告并进行安全处理。

---

五、 结论

      规范、无菌、安全的微生物菌种取样是保障后续检测结果准确性和可靠性的基石，也是实验室生物安全管理的重要环节。北京百欧博伟生物技术有限公司应严格要求操作人员熟练掌握本规范，并在日常工作中时刻保持高度的无菌意识和生物安全意识，确保菌种资源的质量和检测服务的公信力。