血链球菌：探秘口腔中的“红与白”守护者

       血链球菌（Streptococcus sanguinis），隶属于链球菌属，是定植于人类口腔的早期定植菌和优势共生菌之一。它通常无害地栖息在牙齿表面、龈沟及颊粘膜上，是口腔生物膜（牙菌斑）的核心奠基成员。作为α-溶血性链球菌（草绿色链球菌群）的代表，其菌落周围在血琼脂平板上呈现特征性的草绿色溶血环（部分氧化血红蛋白所致）。

近年来，血链球菌因其独特的“双重角色”而备受关注：

• 潜在保护者： 研究发现，血链球菌能通过竞争性排斥、产过氧化氢抑制等方式，拮抗致龋齿的主要病原菌——变形链球菌（Streptococcus mutans）的生长和致龋能力，对维持口腔微生态平衡有积极作用。

• 机会致病者： 在特定条件下（如口腔粘膜破损、免疫力低下、侵入性医疗操作），血链球菌可进入血液循环，成为感染性心内膜炎（IE）的重要病原体之一，尤其易在受损心瓣膜上形成赘生物。它也是菌血症、牙源性脓肿的潜在病原。

因此，血链球菌不仅是研究口腔微生物生态、龋病发生机制的重要模型，也是心血管感染研究和诊断的重要靶标，具有显著的科研与临床价值。

一、菌种培养方法（标准实验室方法）

1. 培养基：

   • 推荐基础： 脑心浸液琼脂（BHI Agar） 或 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）。

   • 关键添加剂： 添加 5% (v/v) 脱纤维羊血 或马血，制成血琼脂平板。血链球菌在血琼脂上生长良好且能清晰观察其α-溶血特性。

   • 液体培养： 可使用脑心浸液肉汤（BHI Broth） 或 胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）。

2. 培养条件：

   • 温度： 37°C （最适人体温度）。

   • 气体环境： 兼性厌氧。推荐在5-10% CO₂ 环境下培养（如CO₂培养箱或烛缸），能显著促进其生长和典型溶血环的形成。在厌氧条件下也能生长。

   • 培养时间： 通常 24-48小时 即可观察到明显菌落。

3. 菌落形态（血琼脂上）：

   • 菌落呈灰白色、半透明或不透明。

   • 直径约1-2mm，表面光滑、凸起、边缘整齐。

   • 特征性α-溶血环： 菌落周围出现宽约1-2mm的草绿色或棕绿色不完全溶血环（部分溶血）。

4. 传代与保存：

   • 短期保存： 穿刺接种于半固体琼脂（如BHI+0.7%琼脂）或斜面，4°C可保存数周。

   • 长期保存： 推荐 冷冻干燥（冻干） 或使用 甘油保存液（终浓度15-20%），于 -70°C 或液氮 中保存。

二、注意事项

1. 生物安全： 血链球菌属于生物安全等级 2 (BSL-2)。操作活菌，尤其涉及高浓度菌液或可能产生气溶胶的操作（如离心、涡旋）时，必须在生物安全柜（BSC） 内进行。佩戴个人防护装备（实验服、手套、护目镜）。

2. 无菌操作： 严格遵守无菌操作规程，防止污染样品或环境。

3. 培养基新鲜度： 使用新鲜配置的血琼脂平板（最好在1周内使用），陈旧平板可能导致溶血环不典型或消失。

4. CO₂环境： 提供充足的CO₂环境对获得典型α-溶血至关重要。

5. 菌种鉴定： 仅凭菌落形态和溶血性不足以准确鉴定血链球菌。需结合革兰染色（革兰阳性球菌，成对或短链排列）、生化试验（如触酶阴性、胆汁七叶苷试验、精氨酸水解试验等）或分子生物学方法（如16S rRNA测序）进行确认。

6. 传代次数： 避免过多传代，以防菌种发生变异或毒力/特性改变。建议从原始冻存管或冻干管进行实验。

三、培养难点分析

1. 溶血环不典型或缺失：

   • 原因： CO₂浓度不足；培养基陈旧（血液成分降解）；培养时间不足；菌株本身溶血性弱。

   • 对策： 确保在5-10% CO₂环境中培养；使用新鲜血琼脂平板；延长培养时间至48小时；选择已知溶血特性良好的标准菌株。

2. 生长缓慢或不良：

   • 原因： 培养基营养成分不足或不适合；接种量过低；培养温度不恒定；抑制剂残留。

   • 对策： 使用营养丰富的培养基（如BHI）；确保足够接种量；校准培养箱温度；检查培养基和试剂是否无菌、无抑制剂。

3. 污染：

   • 原因： 无菌操作不严格；环境或试剂污染。

   • 对策： 强化无菌操作规范；定期清洁消毒工作台和培养箱；使用无菌试剂和耗材。

4. 菌种变异：

   • 原因： 多次非标准化传代；保存条件不当（如反复冻融）。

   • 对策： 减少传代次数，直接从原始保存管复苏；采用标准化、可靠的长期保存方法（冻干或超低温）；定期进行菌种特性验证。

四、应用前景

血链球菌的研究与应用价值正不断拓展：

1. 口腔健康与龋病防治：

   • 益生菌候选： 作为口腔共生菌，其拮抗变形链球菌的特性使其成为开发新型口腔益生菌制剂的热门候选，用于预防龋齿、调节口腔菌群平衡。

   • 微生态机制研究： 深入研究血链球菌与其他口腔细菌的相互作用，是理解龋病发生发展和开发生态防治策略的关键。

2. 感染性疾病诊断与治疗：

   • 感染性心内膜炎诊断： 血链球菌是IE的重要病原体，其快速准确鉴定（如PCR、MALDI-TOF MS）对临床诊断和治疗方案制定至关重要。

   • 致病机制研究： 研究其粘附、侵袭、生物膜形成及逃避宿主免疫的机制，有助于开发新的抗感染靶点和药物。

3. 生物材料与生物膜研究：

   • 作为口腔生物膜的早期定植菌，是研究生物膜形成、发展及抗生物膜策略的理想模型。

   • 研究其与口腔修复材料（如义齿、种植体）的相互作用，对预防相关感染有指导意义。

4. 心血管疾病关联研究：

   • 口腔菌群失调（包括血链球菌的变化）与全身性疾病（如心血管疾病、糖尿病）的关联研究日益深入，血链球菌可能是重要的“口腔-全身健康”纽带分子。