大肠杆菌BW25113培养指南

北京百欧博伟生物技术有限公司（以下简称“百欧博伟”）是一家专注于生命科学领域的高新技术企业，致力于为全球科研机构、医药企业和工业客户提供高品质的生物试剂、实验耗材及专业技术服务。公司以“创新驱动、质量为本”为核心，构建了涵盖分子生物学、细胞生物学、微生物学等多领域的产品体系，同时提供定制化解决方案，助力基因编辑、药物研发、合成生物学等前沿领域的突破性研究。

百欧博伟拥有先进的研发平台和严格的质量管理体系，其产品涵盖基因工程菌株、细胞培养试剂、核酸提取试剂盒等，并凭借专业的技术支持团队，为客户提供从实验设计到数据分析的全流程服务。公司始终秉承“客户至上”的理念，致力于成为生命科学领域的可靠合作伙伴。

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大肠杆菌BW25113：特性与标准化培养方案

菌株背景与特性
大肠杆菌BW25113（Escherichia coli BW25113）是分子生物学研究中广泛应用的K-12衍生菌株，隶属于KEIO单基因敲除文库的核心菌株，适用于基因功能研究、代谢工程及重组蛋白表达等领域。其基因型为：
Δ(araD-araB)567, ΔlacZ4787(::rrnB-3), λ−, rph-1, Δ(rhaD-rhaB)568, hsdR514
主要特点包括：

1. 高效基因编辑：缺乏内源限制系统（hsdR⁻）和重组酶（λ⁻），提高外源DNA导入效率。

2. 代谢缺陷优化：araBAD和rhaBAD缺失，减少碳源代谢干扰，适用于诱导表达系统（如阿拉伯糖/鼠李糖诱导）。

3. 抗生素抗性：通常携带Kanamycin抗性基因（Kan⁺），需在培养基中添加相应抗生素（终浓度30 μg/mL）。

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标准化培养流程

1. 培养基配制

• LB液体培养基：胰蛋白胨10 g/L，酵母提取物5 g/L，NaCl 10 g/L，pH 7.0~7.4。

• LB固体培养基：上述配方添加15 g/L琼脂。

• 抗生素添加：高压灭菌后冷却至50~60℃时加入Kanamycin（终浓度30 μg/mL）。

2. 接种与扩增

• 复苏冻存菌种：取-80℃保存的甘油菌划板（LB+Kan），37℃倒置培养12~16小时。

• 单克隆挑取：挑取单菌落接种至5 mL LB液体培养基（含Kan），37℃、200 rpm振荡培养12小时至对数生长期（OD600≈2.0）。

• 扩大培养：按1:100比例转接至新鲜培养基，继续培养至所需菌量。

3. 关键参数控制

• 温度：37℃恒温培养（重组蛋白诱导表达时需调整温度）。

• 溶氧：液体培养需保证充分震荡（200~250 rpm）。

• 生长监测：通过OD600值判断生长阶段（对数期OD600=0.4~0.6时适合质粒提取或诱导）。

4. 菌体保存

• 短期保存：4℃短期储存（≤1周）。

• 长期保存：菌液与50%甘油等体积混合，-80℃冻存。

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注意事项

1. 严格无菌操作，避免杂菌污染。

2. Kanamycin需过滤除菌，避免高温失效。

3. 使用前确认菌株抗性标记，避免抗生素误用。

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应用领域

• 基因敲除/敲入实验（结合CRISPR或Red/ET重组系统）

• 代谢通路重构与优化

• 重组蛋白表达（需搭配相应质粒系统）