hEM15A永生化培养使用说明书

一、产品信息：
1. 平台编号：bio-69685
2. 细胞名称：hEM15A
3. 物种：人
4. 组织：子宫
5. 细胞形态：梭形，贴壁生长
二、培养方式：
1. 培养基：hEM15A 专用培养基【DMEM/F12(1:1): Ham ＇ s F12/DME Medium(DMEH-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) 15%FBS 】2. 培养环境：37℃、5%CO2
3. 传代培养：当细胞密度达到 80%以上时，可以进行传代，传代比例1:2~1:4，1~2 天传代一次。
（1）用巴氏滴管吸出细胞培养瓶内的培养基；
（2）加入 1ml 的 PBS，轻轻晃动润洗细胞，然后将 PBS 吸出；
（3）加入 1ml 的胰酶，轻轻晃动浸润细胞，然后放在培养箱内消化1~3 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间）；
（4）在显微镜下观察，发现细胞变圆，轻轻晃动细胞便开始脱落，这时可以终止消化；（5）加入 4ml 含血清的完全培养基，用移液器吹打细胞，使细胞脱落并形成单细胞悬液；（6）将细胞悬液转移到 15ml 的离心管，1000rpm 离心 5min；
（7）离心完成后吸出上清丢弃，再用移液管取 10ml 完全培养基将细胞重悬，轻轻吹打混匀；（8）将细胞悬液分装到两个新的 T25 细胞培养瓶中，放在 37℃的 CO2培养箱中进行培养。4. 细胞冻存：使用本公司无血清冻存液可直接将细胞冻存在-80℃（无需使用程序降温盒），细胞在-80℃可保存 3 年，长期保存建议使用液氮罐。
5.冷冻复苏细胞：将含有 1mL 细胞冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟，弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 6cm 皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
三、质量检测：
1. STR 鉴定：正确
2. 细菌检测：阴性
3. 支原体检测：阴性
四、售后服务：
1. 收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；
2. 用 75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置 2-4 小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40 倍和 100 倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；
3. 原瓶中的培养基在细胞传代之后不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；
4. 建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后 7 天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。
5. 强烈建议：在第一次细胞传代时，使用购买本公司配置的细胞培养基将细胞按照1:2进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。
如果有以上任何问题，请及时联系本公司。
五、注意事项：
1. 本产品仅限于科研用途，若用于临床诊断、治疗等其它用途，本公司概不负责！2. 若使用本产品发表科学论文，请标注：hEM15A 人子宫内膜异位症患者在位内膜间质细胞永生化细胞由北京百欧博伟生物技术有限公司（biobw）提供。