LMH鸡肝癌细胞培养全流程指南

一、LMH细胞简介

LMH（Leghorn Male Hepatoma）鸡肝癌细胞是一种来源于白来航鸡肝肿瘤的上皮样细胞系，广泛应用于禽类病毒研究（如禽流感病毒、传染性法氏囊病病毒）、肿瘤发生机制探索及药物筛选实验。其生长特性稳定，贴壁能力强，是禽类生物学研究的重要工具。

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二、细胞购买与接收流程

1. 订购渠道
通过北京百欧博伟生物技术有限公司官网或授权代理商下单，提供以下信息：

• 细胞名称：LMH（Chicken Hepatocellular Carcinoma Cell Line）

• 货号：BBW-CELL-XXX（具体参考公司产品目录）

• 培养基类型及血清需求（建议配套订购专用培养基）

• 运输方式选择（干冰运输或液氮罐气相保存运输）。

2. 接收与验收

• 检查包装完整性：确认外包装无破损，干冰残留量充足（若为干冰运输）。

• 核对信息：比对订单与细胞管标签信息（包括细胞名称、编号、批号）。

• 记录温度：使用红外测温枪检测运输容器内部温度，应≤-150℃（液氮气相）或干冰未完全升华。

• 立即处理：若细胞保存在冻存管中，直接转移至液氮罐长期保存或立即复苏；若为贴壁培养物，按说明书处理。

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三、细胞复苏与初代培养

1. 实验准备

• 预热培养基：含10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素/链霉素的DMEM/F12培养基，37℃水浴预热30分钟。

• 设备预热：培养箱调至37℃、5% CO₂，超净台紫外灭菌30分钟。

2. 复苏步骤

1. 从液氮中取出冻存管，快速置于37℃水浴，轻柔摇晃至完全融化（≤2分钟）。

2. 酒精擦拭冻存管外壁，转移至超净台。

3. 将细胞悬液缓慢加入含5 mL预温培养基的15 mL离心管，1000 rpm离心5分钟。

4. 弃上清，用新鲜培养基轻柔重悬细胞，接种至T25培养瓶，补加培养基至总体积5 mL。

5. 24小时内勿移动培养瓶，待细胞贴壁后更换新鲜培养基。

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四、细胞传代培养

1. 传代时机

• 细胞密度达80%~90%融合，呈典型铺路石样排列（显微镜下观察）。

2. 操作流程

1. 弃旧培养基，用PBS轻柔冲洗2次去除死细胞及代谢物。

2. 加入1 mL 0.25%胰酶-EDTA溶液（含0.02% EDTA），37℃消化1~3分钟。

3. 显微镜下观察细胞间隙增大、变圆后，加入2 mL完全培养基终止消化。

4. 吹打细胞至单细胞悬液，转移至离心管，1000 rpm离心5分钟。

5. 弃上清，重悬后按1:3~1:4比例分瓶，补足培养基继续培养。

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五、常见问题与解决方案

1. 细胞贴壁不良：检查血清批次活性，确保培养基底物无污染（可预涂胶原蛋白）。

2. 污染处理：若出现细菌/真菌污染，立即废弃细胞，对培养箱及操作台彻底消毒。

3. 生长缓慢：检测支原体污染（建议定期使用MycoAlert试剂盒），必要时更换血清。

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六、细胞冻存与保藏

1. 冻存液配制：完全培养基 + 10% DMSO + 20% FBS，现配现用。

2. 冻存步骤：

   • 消化收集对数生长期细胞，离心后重悬于冻存液（密度1×10⁶/mL）。

   • 分装至冻存管，程序降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 2小时 → -80℃过夜 → 液氮长期保存。

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七、注意事项

• 严格无菌操作，避免频繁开关培养箱。

• 定期检测细胞STR图谱，确保无交叉污染。

• 建议每3个月更换新批次细胞，避免长期传代导致特性改变。

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结语
通过规范化的操作流程与严格的质量控制，北京百欧博伟生物技术有限公司提供的LMH细胞可稳定服务于您的科研需求。如需技术支持，请联系我们的专业技术团队。