BL21(DE3)Star培养及保藏方法

1. 菌株简介

BL21(DE3)Star 是大肠杆菌（Escherichia coli）的一种常用表达菌株，适用于蛋白质表达实验。该菌株含有T7 RNA聚合酶基因，受控于lacUV5启动子，适合通过IPTG诱导表达目标蛋白。

2. 培养基

• LB培养基：10 g/L 胰蛋白胨，5 g/L 酵母提取物，10 g/L NaCl，pH 7.0。

• TB培养基：12 g/L 胰蛋白胨，24 g/L 酵母提取物，4 mL/L 甘油，2.31 g/L KH₂PO₄，12.54 g/L K₂HPO₄，pH 7.0。

3. 培养条件

• 温度：37°C

• 摇床转速：200-250 rpm

• 培养时间：通常为12-16小时，或根据实验需求调整。

4. 诱导表达

• 诱导剂：IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）

• 诱导浓度：通常为0.1-1 mM

• 诱导时间：根据目标蛋白特性，一般为2-6小时。

5. 保藏方法

• 短期保藏：4°C保存，可维持1-2周。

• 长期保藏：-80°C保存，使用甘油作为保护剂（终浓度15-20%）。

6. 注意事项

• 无菌操作：避免污染。

• IPTG浓度：需优化以获得最佳表达效果。

• 保存温度：-80°C保存时确保菌液与甘油充分混匀。

总结

BL21(DE3)Star 是一种高效蛋白质表达菌株，通过优化培养和诱导条件，可获得高产量目标蛋白。正确的保藏方法有助于保持菌株活性和稳定性。