一文了解Bacillus subtilis WB800接种培养及保藏

枯草芽孢杆菌WB800（Bacillus subtilis WB800）是一种广泛应用于分子生物学和工业生物技术领域的模式菌株。北京百欧博伟生物技术有限公司为您提供以下WB800的培养方法，助您轻松获得高活性菌体。

一、培养基准备

WB800可使用多种培养基进行培养，以下列举两种常用培养基：

1. LB培养基 (Luria-Bertani Medium):

• 胰蛋白胨 (Tryptone): 10 g/L

• 酵母提取物 (Yeast extract): 5 g/L

• 氯化钠 (NaCl): 10 g/L

• pH 7.0-7.2

2. 营养肉汤培养基 (Nutrient Broth Medium):

• 牛肉膏 (Beef extract): 3 g/L

• 蛋白胨 (Peptone): 5 g/L

• pH 7.0-7.2

配制方法：

1. 准确称取上述试剂，加入去离子水中，搅拌至完全溶解。

2. 使用1 M NaOH或HCl调节pH至7.0-7.2。

3. 分装至试管或锥形瓶中，121°C高压灭菌20分钟。

二、接种与培养

1. 接种:

• 从-80°C保存的WB800甘油菌种中，使用无菌接种环挑取少量菌液，划线接种至LB固体培养基平板上。

• 37°C倒置培养12-16小时，直至单菌落出现。

2. 扩大培养:

• 挑取单菌落接种至装有5 mL LB液体培养基的试管中，37°C、200 rpm振荡培养12-16小时。

• 按1:100的比例将上述菌液转接至装有50 mL LB液体培养基的锥形瓶中，37°C、200 rpm振荡培养至对数生长期（OD600 ≈ 0.6-0.8）。

三、菌体收集与保存

1. 菌体收集:

• 将培养液于4°C、5000 rpm离心10分钟，收集菌体。

• 使用无菌生理盐水或PBS缓冲液洗涤菌体两次，去除培养基残留。

2. 菌体保存:

• 短期保存：将菌体悬浮于LB液体培养基中，4°C保存，可保存1-2周。

• 长期保存：将菌体与无菌甘油按1:1比例混合，-80°C保存，可保存数年。

四、注意事项

• 实验操作需在无菌条件下进行，避免杂菌污染。

• 培养温度和时间可根据实验需求进行调整。

• 菌体保存过程中应避免反复冻融，以免影响菌体活性。

北京百欧博伟生物技术有限公司致力于为生命科学研究提供优质的产品和服务，我们提供多种规格的WB800菌株及配套培养基，欢迎垂询！