RMa-bm 大鼠巨噬细胞培养指南及应用

一、 细胞介绍

RMa-bm 大鼠巨噬细胞是由北京百欧博伟生物技术有限公司从大鼠骨髓中分离并建立的永生化细胞系。该细胞具有典型的巨噬细胞形态，贴壁生长，并表达多种巨噬细胞表面标志物，如 CD11b、CD68 等。RMa-bm 细胞具有良好的增殖能力和吞噬功能，可用于研究巨噬细胞在免疫调节、炎症反应、肿瘤发生发展等方面的作用机制。

二、 细胞培养

1. 培养基及试剂

• 基础培养基：DMEM 高糖培养基

• 胎牛血清 (FBS)：10%

• 青霉素-链霉素双抗：1%

• 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 消化液

• PBS 缓冲液

2. 培养条件

• 培养温度：37℃

• CO2 浓度：5%

• 湿度：饱和湿度

3. 细胞复苏

1. 从液氮罐中取出冻存的 RMa-bm 细胞，迅速放入 37℃ 水浴中，轻轻摇晃至完全融化。

2. 将细胞悬液转移至 15 mL 离心管中，加入 5 mL 预热的完全培养基，轻轻吹打混匀。

3. 1000 rpm 离心 5 分钟，弃去上清。

4. 加入适量完全培养基重悬细胞，接种至培养瓶中，放入培养箱中培养。

4. 细胞传代

1. 当细胞融合度达到 80%-90% 时，即可进行传代。

2. 弃去培养瓶中的旧培养基，加入适量 PBS 缓冲液清洗细胞 2 次。

3. 加入适量 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 消化液，室温消化 1-2 分钟。

4. 显微镜下观察细胞变圆脱落，加入等体积完全培养基终止消化。

5. 轻轻吹打细胞至完全脱落，将细胞悬液转移至 15 mL 离心管中，1000 rpm 离心 5 分钟。

6. 弃去上清，加入适量完全培养基重悬细胞，按 1:2 或 1:3 的比例接种至新的培养瓶中，放入培养箱中培养。

5. 细胞冻存

1. 选择处于对数生长期的细胞进行冻存。

2. 按照细胞传代的方法收集细胞，1000 rpm 离心 5 分钟，弃去上清。

3. 加入适量冻存液 (90% FBS + 10% DMSO) 重悬细胞，调整细胞密度至 1×10^6 - 5×10^6 个/mL。

4. 将细胞悬液分装至冻存管中，每管 1 mL。

5. 将冻存管放入程序降温盒中，-80℃ 冰箱过夜，然后转移至液氮罐中长期保存。

三、 细胞应用

RMa-bm 大鼠巨噬细胞可用于以下研究：

• 免疫调节: 研究巨噬细胞在固有免疫和适应性免疫中的作用，以及与其他免疫细胞的相互作用。

• 炎症反应: 研究巨噬细胞在炎症反应中的作用机制，以及炎症相关疾病的治疗靶点。

• 肿瘤发生发展: 研究巨噬细胞在肿瘤微环境中的作用，以及肿瘤免疫治疗的策略。

• 药物筛选: 筛选具有抗炎、抗肿瘤等作用的药物。

四、 注意事项

• 细胞培养过程中应严格无菌操作，避免污染。

• 细胞消化时间不宜过长，以免影响细胞活力。

• 细胞冻存和复苏过程中应严格控制降温速度和复温速度，以保证细胞存活率。

• 本指南仅供参考，具体实验操作请根据实际情况进行调整。

        北京百欧博伟生物技术有限公司是一家专业从事细胞培养、细胞模型构建、药物筛选等服务的生物技术公司。公司拥有丰富的细胞资源和经验丰富的技术团队，可为客户提供高质量的细胞产品和专业的技术服务。