SZ95皮脂腺细胞培养传代方法-北京百欧博伟生物

SZ95人皮脂腺细胞培养及传代

1. 细胞培养条件

• 培养基：DMEM/F12（1:1）培养基，添加10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素、10 ng/mL EGF、0.5 μg/mL氢化可的松、5 μg/mL胰岛素、100 pM霍乱毒素。

• 培养环境：37°C，5% CO₂，95%湿度。

• 

2. 细胞传代步骤

1. 准备：

   • 预热培养基、PBS和胰酶至37°C。

   • 准备新的培养瓶或培养皿。

2. 移除旧培养基：

   • 吸出旧培养基，用PBS洗涤细胞2-3次，去除残留血清。

3. 消化细胞：

   • 加入适量胰酶（0.25%胰酶-EDTA），37°C孵育2-3分钟，显微镜下观察细胞变圆后停止消化。

4. 终止消化：

   • 加入等体积含血清的培养基终止反应，轻轻吹打细胞使其脱落。

5. 离心：

   • 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm离心5分钟，弃上清。

6. 重悬细胞：

   • 用新鲜培养基重悬细胞，调整细胞密度。

7. 接种：

   • 将细胞悬液接种至新培养瓶或培养皿，放入培养箱继续培养。

3. 注意事项

• 无菌操作：所有步骤需在无菌条件下进行。

• 细胞密度：传代时保持适当密度，避免过密或过稀。

• 培养基更换：每2-3天更换一次培养基，保持细胞健康。

4. 细胞冻存与复苏

• 冻存：使用含10% DMSO的冻存液，程序降温后存于液氮。

• 复苏：37°C水浴快速解冻，离心后重悬接种。

总结

SZ95人皮脂腺细胞的培养和传代需严格控制条件，无菌操作和适当的细胞密度是关键。