NCI-H460人大细胞肺癌细胞常规培养传代流程

　　NCI-H460细胞是从一位大细胞肺癌患者的胸水中建立的。NCI-H460细胞表达的p53 mRNA易于检测，其水平与正常肺细胞相当，未表现出NCI-H460细胞DNA总体结构异常。NCI-H460细胞角蛋白和波形蛋白纤维染色阳性；神经丝三联体蛋白阴性。

　　细胞名称：NCI-H460[H460]（人大细胞肺癌细胞）

　　种属：人

　　年龄（性别）男

　　组织来源：肺；转移灶：肋膜渗出癌；大细胞肺癌

　　生长特性：贴壁

　　细胞形态：上皮细胞样

　　生长培养基：RPMI-1640＋10%FBS＋1%P/S

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　NCI-H460[H460](人大细胞肺癌细胞)接收后的操作流程与注意事项

　　1.细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。

　　2.如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。

　　3.贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。

　　4.生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。

　　七、NCI-H460[H460](人大细胞肺癌细胞)常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）

　　1.吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25%EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。

　　2.镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

　　3.取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。

　　4.注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。

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