质粒提取失败？10个原因帮你找出问题

　　在进行质粒提取时，未能成功提取质粒或质粒得率低的原因有很多。以下是可能的原因及解决方法：

　　1、细菌老化：培养的细菌可能已经老化，导致质粒提取失败。建议重新挑选新菌落进行液体培养。

　　2、细菌培养物生长过度：细菌培养物在37℃下培养超过16小时，或者长时间存放培养物，都会影响质粒的提取。

　　3、质粒拷贝数低：使用低拷贝数载体可能导致质粒DNA提取量低。可以尝试更换为高拷贝数载体。

　　4、菌体中无质粒：某些菌体本身不能在某些菌种中稳定存在，可能导致质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定。

　　5、菌体过量，碱裂解不充分：取样时菌液过多，导致菌体裂解不充分。可以减少菌体用量或增加溶液悬浮液、裂解液、中和液的用量。

　　6、溶液使用不当：裂解液和中和液在温度较低时容易出现盐析。如出现盐析，应将其放入37℃水浴至完全溶解、澄清。

　　7、质粒未全部溶解：洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。

　　8、乙醇残留：洗涤液Ⅱ洗涤后应离心并静置数分钟尽量去除残留乙醇后，再加入洗脱液洗脱回收。

　　9、洗脱液加入位置不正确：洗脱液应加入吸附柱中膜的中央，以确保洗脱液完全覆盖吸附膜的表面，达到最大洗脱效率。

　　10、洗脱效率：洗脱效率与洗脱液PH值、洗脱液用量、洗脱次数、加入洗脱液后的静置时间和是否预热等因素有关。PH7.0-8.5之间，洗脱液用量不得小于50μl，重复洗脱2-3次，增加室温静置时间及65℃水浴预热可以有效提高得率30%。

　　通过以上方法，可以有效解决质粒提取失败或得率低的问题。希望这些建议能帮助你顺利提取质粒！