细胞转染方法以及转染试剂的选择

转染方法以及转染试剂的选择

　　目前细胞转染主要有物理、化学和生物三种方法。关于物理转染，一般实验室无法满足相关的硬件要求，因为这种方法需要特定的仪器耗材；另外物理转染需要充分的转染参数测试，才能获得较好的转染效果。化学转染是目前进行细胞转染较为通用的方法，这种方法价格便宜、操作简单。不过有些细胞对化学转染不敏感、转染效率低，这种细胞便可尝试生物转染的方法。

　　应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。不同转染试剂有不同的转染方法，转染时应跟据具体转染试剂推荐的方法步骤进行实验。另外，由于细胞性质不同、质粒定量差异、操作手法差异等，转染效果可能会不同，应根据实验室的具体条件来确定最佳转染条件。

　　细胞状态和密度

　　转染前的细胞状态和密度都会影响转染效率以及后续的实验结果。最适合进行转染的细胞是解冻后传代3～4次、处于指数生长期、活性>90%的细胞。

　　为了确保细胞状态良好应需注意以下几点：

　　首先要确保细胞未受细菌、真菌、病毒、支原体或其他细胞的污染。

　　选择传代次数较低、处于指数生长期的细胞进行转染。

　　细胞密度达到60%-80%时进行转染，此时的转染效率较高。细胞密度过高或过低都可能影响转染效果和细胞存活率。

　　转染后收细胞时的密度也不要过高。因为细胞密度过高会严重影响细胞状态从而影响实验结果。一般为前一天下午铺板，次日上午进行转染，48小时后收细胞进行功能检测。

　　使用优质的、浓度合适的DNA

　　为实现高效率、低毒性的转染，应使用高质量（高纯度、无菌、无内毒素）的DNA。如果DNA纯度差，其携带的少量的盐离子、蛋白、代谢物都会影响到转染效率；被内毒素污染的质粒会对宿主细胞产生很大的毒性作用。

　　不同的细胞进行转染时，其效率通常不同。因此在进行正式的细胞转染前需要进行预实验，来筛选合适的DNA浓度以保证较高的转染效率。