细胞老是养不好,除了几大常见原因,这个因素你考虑过吗?

　　养细胞的囧事可能小伙伴们都经历过：不做实验的时候，细胞长得老快了；一到做实验的时候，自家的细胞好像吃了安眠药一样，昏昏欲睡，死活长不起来。

　　这个时候咋办呢？为了让我们的细胞茁壮成长，作为“爹妈”的我们自然得找原因，想办法喽！

　　导致细胞生长缓慢的常见原因：

　　（一）培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子，出现这种情况一般都是小伙伴们购买细胞后没有按照ATCC或国内细胞库推荐的方法配制培养基，就使用实验室师兄师姐用的培养基去养细胞。处理方法一般来说就是按照推荐方法配制培养基，或是直接购买所养细胞专用的培养基。

　　（二）细菌、支原体、真菌等污染：虽然现在培养基里面一般都会添加双抗（青霉素和链霉素），但是如果无菌操作观念不强，依然很有可能导致污染。处理方法：如果有冻存的细胞，就可以把污染的细胞丢弃处理，当然，丢弃不是随意扔进垃圾桶就可以了，要按照实验室生物安全规范操作进行。然后重新复苏培养，建议把培养箱进行全面的消毒处理。若是没有冻存，而这种细胞又是很珍贵的，常见的处理方法就是药物处理：细菌污染加5-10倍的抗生素；真菌污染就加抗真菌药物；支原体污染就加抗支原体药物，具体药物可以咨询相关公司的技术支持，他们会比较专业。

　　（三）很多细胞的生长存在密度依赖性，如果传代后，细胞的密度太小，也是会影响到细胞生长的。这个时候没什么特别好的处理办法，只得勤换液。如果细胞培养瓶使用的是T75倒可以消化、离心、重悬，然后接种到T25的培养瓶中培养。

　　（四）冻存细胞DMSO（二甲基亚砜）加的量不正确，没有逐步梯度降温。下次复苏后的细胞总是长不好。处理方法：按照推荐的冻存方式配制冻存液。有的细胞适合10%的DMSO，有的细胞适合5%；严格遵守逐步梯度降温原则，细胞复苏时快速解冻。

　　（五）换液间隔时间太长，有的小伙伴养细胞真的很“佛系”，想起了就去换个液，信奉一句话“你已经是成熟的细胞了，应该学着自己觅食，成长”。这种情况下细胞培养瓶中就会积累很多细胞代谢废物，影响细胞活性。建议：勤换液

　　（六）细胞“消化”时间不宜过长，减少对细胞损伤；另外胰酶中一般会添加EDTA，螯合钙离子，影响细胞贴壁。处理方法：控制好细胞“消化”时间，尽量去除干净胰酶和其中的EDTA.

　　（七）PH：细胞需要在一定的PH值下生长，这个道理小伙伴们都懂。但是很多时候PH都是我们忽略的，也是小编今天要强调的一点。我们使用的培养基可能会随着使用时间的加长而缓慢变碱哦！（当然，也有可能会变酸，但常见的是变碱），一般来说，过碱的培养基会影响到细胞生长。处理方法：最简单的就是换新鲜培养基呗！当然，如果有时间和有条件也可以调一调培养基的PH值。

　　好了，小编能够想到的就是这些了，希望能给小伙伴们带来些许帮助！

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