HMC-1人肥大细胞培养步骤及注意事项

　　一、HMC-1人肥大细胞介绍

　　产品类别：人源细胞系

　　生长特性：悬浮细胞

　　培养体系：DMEM+10%FBS

　　传代方法：第一次建议1:2传代

　　细胞形态：圆形

　　冻存条件：无血清细胞冻存液

　　二、细胞培养条件

　　英文名称Hmc-1中文名称人肥大细胞

　　生长特性圆形、悬浮冻存条件无血清冻存液

　　培养体系DMEM+10%FBS

　　传代方法1:2-1:3,第一次建议1:2传代传代情况2~3天换液/传代

　　备注用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养

　　三、细胞收到后处理

　　收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置若干小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100×，200×各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行售后的依据。

　　细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

　　四、细胞培养步骤

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　1、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

　　方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

　　方法二：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

　　PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

　　3）细胞冻存：

　　1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

　　2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

　　3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；

　　4、先将细胞冻存管放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃。

　　五、质量检测：

　　1.细菌检测：阴性

　　2.支原体检测：阴性

　　六、售后服务：

　　1.收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；

　　2.用75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40倍和100倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；

　　3.原瓶中的培养基不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4.建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后7天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。

　　5.强烈建议：在第一次细胞传代时，使用购买本公司配置的细胞培养基将细胞按照1:2进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。

　　如果有以上任何问题，请及时联系本公司。

　　七、注意事项：

　　1.本产品仅限于科研用途，若用于临床诊断、治疗等其它用途，本公司概不负责！2.若使用本产品发表科学论文，请标注：HMC-1由北京百欧博伟生物技术有限公司（BIOBW）提供。