SNU-719人胃癌细胞培养方法及售后

　　一、SNU-719/SNU719人胃癌细胞简介

　　平台编号：bio-107464

　　规格：1×10⁶cells/T25培养瓶

　　产品类别：人源细胞系

　　生长特性：贴壁生长

　　培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS

　　传代方法：1：2传代

　　细胞形态：上皮细胞样

　　冻存条件：无血清细胞冻存液

　　保存条件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

　　细胞描述本库的细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的，使用者不得将本库细胞转让给第三者。

　　二、细胞收到后处理：

　　细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

　　三、细胞培养步骤：

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

　　3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

　　4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

　　PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

　　四、质量检测：

　　1.STR鉴定：正确

　　2.细菌检测：阴性

　　3.支原体检测：阴性

　　四、售后服务：

　　1.收到细胞后请及时查看瓶身有无破损，是否漏液等现象；

　　2.用75%的酒精喷洒培养瓶之后，放在培养箱中静置2-4小时以稳定细胞状态，然后用显微镜观察细胞状态并拍照记录，40倍和100倍照片各一张（细胞在运输过程中存在少量的漂浮或者死亡属于正常现象）；

　　3.原瓶中的培养基不建议继续使用，请配制新的完全培养基或者购买本公司的专用培养基；4.建议定期对细胞进行拍照记录；收到细胞后7天内，对细胞生长状态有任何问题，可申请售后。

　　5.强烈建议：在第一次细胞传代时，使用购买本司配置的细胞培养基将细胞按照1:2进行传代，可以对比测试自配的培养基是否可以养好细胞。

　　如果有以上任何问题，请及时联系本公司。