粪肠球菌培养说明及形态与染色

　　一、菌种简介

　　粪肠球菌（Enterococcus faecalis）为革兰氏阳性，过氧化氢阴性球菌。其原属于链球菌属，因其与其他链球菌同源程度低，甚至不到9%，故将粪肠球菌与屎肠球菌从链球菌属中分离出来，将其归为肠球菌属。粪肠球菌是一种兼性厌氧型革兰氏阳性乳酸菌，菌体形态为球状或链状，直径大小，无荚膜，无芽孢，对环境适应力和抵抗力强，可耐受四环素、卡那霉素、庆大霉素等多种抗生素，生长条件要求不严格。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。

　　生物学特性

　　形态与染色

　　革兰阳性球菌，单个、成双或短链排列的卵圆形球菌，无芽孢、无荚膜。

　　菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长，直径0.5-1.0微米，大多数成双或短链状排列，通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1-2毫米，全缘，罕见色素。

　　培养特性

　　在血琼脂平板上35℃培养18-24h，形成较小、灰白色、湿润、凸起、有α或γ溶血环的菌落。在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。在脑心浸液肉汤中均匀浑浊生长。

　　其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。

　　二、培养基

　　*营养琼脂培养基（NA）

　　*LB培养基

　　三、保藏条件

　　培养物和安瓿冻干菌种应在2-8°C保存。西林瓶请放-20°C保存。甘油请置于-80°C保藏。注意事项

　　1）冻干粉首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取0.3ml的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过2支平板）；

　　2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；

　　3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；

　　4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；

　　5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为2-25年；

　　6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活等情况，请在收到后2个月内联系，逾期不予受理；

　　7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛。

　　8）安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作。

　　9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。

　　欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，官方网址：www.biobw.org，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！

　　北京百欧博伟生物技术有限公司拥有Biolog微生物鉴定系统，超低温冰箱，生物安全柜等仪器设备可进行对微生物分离、鉴定等常规的分子实验研究。对我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展的需求进行积极的面对社会乃至国外收集保藏提供微生物菌种资源。在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供微生物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。