产气肠杆菌军中介绍及保藏条件

　　一、产气肠杆菌介绍

　　产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)系有膜、无芽胞、有鞭毛的革兰氏染色阴性直杆菌，在普通培养基上生长良好。能发酵多种糖类产酸产气。产气肠杆菌常存在于动物肠道、粪便、河水、土质及饲料中，可使饲料变质或营养价值破坏。

　　产气肠杆菌主要生存于人类和动物的肠道，为人体内的正常菌群，只有在人体虚弱的特殊情况下才偶尔引起疾病。亦生存于水、土壤及腐败物中。但亦可独自生存。肠杆菌科能适应的温度范围甚广，在15-40℃之间。产气肠杆菌最适合生长于温度30℃，pH=7的环境下。

　　菌体形态

　　产气肠杆菌为革兰阴性粗短杆菌，有周身鞭毛，能运动，部分菌株有荚膜，无芽孢。菌体大小长约1.2-3.0μm、宽0.6-1.0μm，为革兰氏阴性的兼性厌氧杆菌。为肠内细菌。不产胞子且具有小的荚膜。其有周鞭毛，可以活动

　　培养特性

　　在血琼脂平板上35℃培养18-24h，形成圆形、凸起、灰白色、不溶血的菌落。在麦康凯等培养基上形成粉红色(乳糖发酵)、较大菌落。

　　生化反应

　　氧化酶试验阴性，发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖等多种糖类，不发酵卫矛醇，TSI为A/A。IMviC--++，动力、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验均为阳性，H2S、精氨酸双水解酶试验均为阴性。

　　二、培养基

　　*营养琼脂培养基（NA）

　　*胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA）

　　*LB培养基（以上培养基三选一即可）

　　三、保藏条件

　　培养物和安瓿冻干菌种应在2-8°C保存。西林瓶请放-20°C保存。甘油请置于-80°C保藏。注意事项

　　1）冻干首次活化，干粉要全部用完，不能预留，用无菌吸管吸取0.3ml的培养液（即以上建议的培养基配方，不加琼脂）或者无菌水，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。吸取全部菌悬液，接种在培养基上（建议不超过2支斜面或平板；或直接接种液体培养基，以不超过5ml为宜）；

　　2）经过冷冻干燥保藏，菌种处于休眠状态，复苏培养时可能会延迟生长，这时需较长的培养时间；若您收到的是已复苏的培养物（非冻干菌），则可以直接用于您的实验，或根据需要转接培养；如有不明白之处，请务必先咨询我单位技术人员，避免不必要的损失；二次接种量要多，固体斜面培养基水分要少才能让菌体长得比较明显，液体培养要静止培养；3）微生物菌种应保藏于低温、清洁干燥的地方，室温放置时间过长会导致菌种衰退；4）菌种操作应在无菌条件下进行；转种完毕，应经灭菌再做丢弃处理；5）应根据菌种状况及时转接，冻干菌种保藏时间通常为2-25年；

　　6）菌种使用过程中如出现杂菌污染或菌种生产性能下降或不活等情况，请在收到后2个月内联系，逾期不予受理；

　　7）打管操作需由专业微生物技术人员在相应的防护设备中进行，生物危害程度为三类的菌种应在生物安全柜中操作，打管时冻干管应远离面部，保护眼睛；

　　8）安瓿瓶开封：用浸过75％酒精的脱脂棉擦净安瓿管，用火焰加热其顶端，滴少量（2-3滴）无菌水至加热顶端使之破裂，用锉刀或者镊子敲下已破裂的安瓿管顶端并将冻干管开口处在火焰上过一遍，并保持在火焰旁操作；

　　9）甘油管使用：使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。